A hisztidin-tartalmú fehérje, a HPr aktív helyének His(15) maradékát aszpartátra lehet cserélni, és még mindig foszfoakceptorként és foszfodonorként működhet az I enzim, illetve az IIA(glükóz) enzim esetében. Más helyettesítések, beleértve a ciszteint, glutamátot, szerint, treonint és tirozint, nem mutattak semmiféle aktivitást. Az enzim I K(m) a His(15) –> Asp HPr esetében 10-szeresére nőtt, a V(max) pedig 1000-szeresére csökkent a vad típusú HPr-hez képest. Az Asp(15) foszforilációja a foszforilcsoport és egy vízmolekula elvesztésével járó spontán belső átrendeződéshez vezetett, amit tömegspektrometriával igazoltunk. A kialakult fehérje species magasabb pI-vel rendelkezett, mint a His(15) –> Asp HPr, ami egy szukcinimid vagy egy izoimid kialakulásából eredhet. Az izolált magas pI-jű forma hidrolízise csak aszparaginsavat adott a 15-ös maradéknál, izoaszparaginsavat nem mutattunk ki. Ez azt jelzi, hogy nem szukcinimid, hanem izoimid képződik. Foszforiláció hiányában nem volt kimutatható a magas pI-jű forma képződése, ami arra utal, hogy a foszforiláció katalizálta a ciklizáció kialakulását. Az Asn(12) lehetséges részvételét az Asp(15) belső ciklizációjában az Asn(12) –> Ala mutációval a His(15) –> AspHPr-ben kiküszöböltük. Az alanin, aszpartát, szerin és treonin Asn(12) helyettesítése a vad típusú HPr-ben a His(15) Nepszilon(2) atomjával hidrogénkötést kialakítani képes maradékok általános követelményét jelezte, de a hidrogénkötés megszüntetése csak 4-szeres k(kat)/K(m) csökkenést eredményezett.
Szervezeti hovatartozás: 
Department of Biochemistry, University of Saskatchewan, Saskatoon, Saskatchewan S7N 5E5, Canada.
Hide Full Abstract