Il residuo del sito attivo, His(15), nella proteina contenente istidina, HPr, può essere sostituito da aspartato e ancora agire come un fosfoacettore e fosfodonatore con l’enzima I e l’enzima IIA(glucosio), rispettivamente. Altre sostituzioni, tra cui cisteina, glutammato, serina, treonina e tirosina, non hanno mostrato alcuna attività. L’enzima I K(m) per His(15) –> Asp HPr è aumentato di 10 volte e V(max) è diminuito di 1000 volte rispetto al tipo selvaggio HPr. La fosforilazione di Asp(15) ha portato ad un riarrangiamento interno spontaneo che coinvolge la perdita del gruppo fosforilico e una molecola d’acqua, che è stato confermato dalla spettrometria di massa. La specie della proteina formata ha avuto un più alto pI che His(15) –> Asp HPr, che potrebbe derivare dalla formazione di un succinimide o di un isoimide. L’idrolisi della forma isolata ad alto pI ha dato solo acido aspartico al residuo 15, e nessun acido isoaspartico è stato rilevato. Questo indica che si forma un’isoimmide piuttosto che una succinimmide. In assenza di fosforilazione, non è stata trovata alcuna formazione della forma ad alto pI, indicando che la fosforilazione ha catalizzato la formazione della ciclizzazione. Il possibile coinvolgimento di Asn(12) in una ciclizzazione interna con Asp(15) è stato eliminato dalla mutazione Asn(12) –> Ala in His(15) –> AspHPr. Le sostituzioni Asn(12) di alanina, aspartato, serina e treonina in HPr wild type hanno indicato un requisito generale per i residui in grado di formare un legame a idrogeno con l’atomo Nepsilon(2) di His(15), ma l’eliminazione del legame a idrogeno ha solo una diminuzione di 4 volte di k(cat)/K(m).
Affiliazione organizzativa: 
Dipartimento di Biochimica, Università di Saskatchewan, Saskatchewan S7N 5E5, Canada.
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