Reziduul situsului activ, His(15), din proteina care conține histidină, HPr, poate fi înlocuit cu aspartat și poate acționa în continuare ca fosfoacceptor și fosfodonor cu enzima I și, respectiv, enzima IIA(glucoză). Alte substituții, inclusiv cisteină, glutamat, serină, treonină și tirozină, nu au prezentat nicio activitate. Enzima I K(m) pentru His(15) –> Asp HPr este crescută de 10 ori, iar V(max) este redusă de 1000 de ori în comparație cu HPr de tip sălbatic. Fosforilarea lui Asp(15) a dus la o rearanjare internă spontană care implică pierderea grupei fosforil și a unei molecule de apă, care a fost confirmată prin spectrometrie de masă. Specia proteică formată a avut un pI mai mare decât His(15) –> Asp HPr, ceea ce ar putea rezulta din formarea unei succinimide sau a unei izoimide. Hidroliza formei izolate cu pI ridicat a dat numai acid aspartic la reziduul 15 și nu a fost detectat acid izoaspartic. Acest lucru indică faptul că se formează mai degrabă o izoimidă decât o succinimidă. În absența fosforilării, nu s-a putut constata formarea formei cu pI ridicat, ceea ce indică faptul că fosforilarea a catalizat formarea ciclizării. Posibila implicare a lui Asn(12) într-o ciclizare internă cu Asp(15) a fost eliminată prin mutația Asn(12) –> Ala în His(15) –> AspHPr. Substituțiile Asn(12) de alanină, aspartat, serină și treonină în HPr de tip sălbatic au indicat o cerință generală pentru reziduuri capabile să formeze o legătură de hidrogen cu atomul de Nepsilon(2) din His(15), dar eliminarea legăturii de hidrogen are doar o scădere de 4 ori a k(cat)/K(m).
Afilierea organizațională:  
Departamentul de Biochimie, University of Saskatchewan, Saskatoon, Saskatchewan S7N 5E5, Canada.
Hide Full Abstract