Reszta miejsca aktywnego, His(15), w białku zawierającym histydynę, HPr, może być zastąpiona asparaginianem i nadal działać jako fosfoakceptor i fosfodonor odpowiednio z enzymem I i enzymem IIA(glukoza). Inne substytucje, w tym cysteina, glutaminian, seryna, treonina i tyrozyna, nie wykazały żadnej aktywności. Enzym I K(m) dla His(15) –> Asp HPr jest zwiększony 10-krotnie, a V(max) jest zmniejszone 1000-krotnie w porównaniu do HPr typu dzikiego. Fosforylacja Asp(15) prowadziła do spontanicznej wewnętrznej rearanżacji polegającej na utracie grupy fosforanowej i cząsteczki wody, co zostało potwierdzone za pomocą spektrometrii mas. Powstały gatunek białka miał wyższe pI niż His(15) –> Asp HPr, co mogło wynikać z powstawania sukcynimidu lub izoimidu. Hydroliza wyizolowanej formy o wysokim pI dała tylko kwas asparaginowy przy reszcie 15, nie wykryto kwasu izoasparaginowego. Wskazuje to, że powstaje raczej izoimid niż sukcynimid. Przy braku fosforylacji nie stwierdzono powstawania formy o wysokim pI, co wskazuje, że fosforylacja katalizuje powstawanie cyklizacji. Możliwy udział Asn(12) w wewnętrznej cyklizacji z Asp(15) został wyeliminowany przez mutację Asn(12) –> Ala w His(15) –> AspHPr. Substytucje Asn(12) alaniny, asparaginianu, seryny i treoniny w HPr typu dzikiego wskazywały na ogólne zapotrzebowanie na reszty zdolne do tworzenia wiązania wodorowego z atomem Nepsilon(2) w His(15), ale eliminacja wiązania wodorowego spowodowała tylko 4-krotny spadek k(cat)/K(m).
Afiliacja organizacyjna: 
Department of Biochemistry, University of Saskatchewan, Saskatoon, Saskatchewan S7N 5E5, Canada.
Hide Full Abstract