Den aktive site rest, His(15), i histidinholdigt protein, HPr, kan erstattes af aspartat og stadig fungere som en fosfoacceptor og fosfodonor med henholdsvis enzym I og enzym IIA(glukose). Andre substitutioner, herunder cystein, glutamat, serin, threonin og tyrosin, viste ikke nogen aktivitet. Enzym I K(m) for His(15) –> Asp HPr er forøget 10 gange og V(max) er nedsat 1000 gange i forhold til vild type HPr. Phosphorylering af Asp(15) førte til en spontan intern omlægning, der involverede tab af fosforylgruppen og et vandmolekyle, hvilket blev bekræftet ved massespektrometri. Den dannede proteinart havde et højere pI end His(15) –> Asp HPr, hvilket kunne skyldes dannelsen af et succinimid eller et isoimid. Hydrolyse af den isolerede form med højt pI gav kun asparaginsyre ved rest 15, og der blev ikke påvist isoasparaginsyre. Dette tyder på, at der dannes et isoimid snarere end et succinimid. I fravær af fosforylering kunne der ikke findes nogen dannelse af den høje pI-form, hvilket indikerer, at fosforylering katalyserede dannelsen af cykliseringen. Den mulige inddragelse af Asn(12) i en intern cyklisering med Asp(15) blev elimineret ved Asn(12) –> Ala-mutationen i His(15) –> AspHPr. Asn(12)-substitutioner af alanin, aspartat, serin og threonin i wild type HPr indikerede et generelt krav om rester, der er i stand til at danne en hydrogenbinding med Nepsilon(2)-atomet i His(15), men eliminering af hydrogenbindingen har kun et 4-dobbelt fald i k(cat)/K(m).
Organisatorisk tilknytning: 
Department of Biochemistry, University of Saskatchewan, Saskatoon, Saskatchewan S7N 5E5, Canada.
Skjul det fulde resumé