Monissa tapauksissa radiomerkityn materiaalin (PAIRA-Pure Active Ingredient, Radiolabelled) käyttöä pidetään pakollisena, ja radiomerkinnän valintana on tavallisesti hiili-14-isotooppi. Joissakin tapauksissa voidaan käyttää tritiumia, mutta sen käyttöä ei suositella tai se on jopa kielletty, koska vedyn ja tritiumin vaihtuminen voi vaikeuttaa tietojen tulkintaa.
Syyt hiili-14:n valintaan
- 14C on ensisijainen sääntelyisotooppi
- Sillä on pitkä puolivuotinen…siten ei tarvitse korjata hajoamista laajoissa tutkimuksissa
- Määritelty leima-asema(t) molekyylin ydinrakenteessa
- Yhdisteet voidaan valmistaa räätälöidyn räätälöidyn synteesin avulla
- Tarjoaa erittäin herkän menetelmän kvantitatiiviseen havaitsemiseen. & Kvalitatiivinen
- Mahdollistaa kantatuotteiden ja metaboliittien kohtalon seuraamisen ja polkujen selvittämisen
- Kriittiset laadunvalvontatoimenpiteet, GLP mukaan luettuna, tukevat sen käyttöä lainsäädännöllisissä tutkimuksissa
Esimerkkejä ohjeistuksesta, jossa tuodaan esiin radiomerkin luonne ja hiili-14 erityisesti:
Radiomerkit on sijoitettava paikkoihin (tarvittaessa yhteen tai useampaan), jotta helpotetaan aineenvaihdunta- ja muuntumisreittien selvittämistä sekä tehoaineen ja sen metaboliittien, reaktio- ja hajoamistuotteiden jakautumisen tutkimista (EU 283/2013).
Tiedot aineenvaihdunnasta sekä kaavamainen kaavio aineenvaihduntareiteistä kasveissa ja eläimissä vaaditaan, ja nämä tutkimukset on suoritettava yhdellä tai useammalla radiomerkityllä tehoaineen muodolla ja tarvittaessa tehoaineen ja sen aineenvaihduntatuotteiden stereoisomeerimuodoilla (EU 283/2013).
Radiomerkkejä tarvitaan, jotta voidaan kvantifioida kokonaisuutena uutettavissa olevat ja uuttamattomat jäämät, ja 14C on suositeltavin isotooppi jäämätutkimuksia varten (OECD 501).
14C-merkitty materiaali on edellytys joillekin tutkimuksille (OECD 304A).
14C-atomin tulisi sijaita molekyylin palautuvimmassa osassa (OECD 314)
Jos yhdisteessä on rengasrakenteita, tehdään kokeet erikseen jokaiselle renkaalle siten, että kussakin kokeessa leimataan enintään yksi rengasrakenne (OCSPP 850 170 & 1730).
Erillisiä tutkimuksia, jotka heijastavat kunkin renkaan merkitsemistä, vaaditaan yleensä (OECD 502), jos molekyylin pilkkoutuminen tapahtuu- radiomerkinnän lisäksi suositellaan vakaiden isotooppien käyttöä.
Radiomerkintä voi olla suositeltavampi lannalla tehtävissä tutkimuksissa, joissa fenyylirengas U-14C on erityisen suositeltava, koska 14C CO2 ja 14C haihtuvat aineet, kuten 14CH4, on otettava talteen (EMA/CVMP 2009/430327).
14C:tä olisi käytettävä kaikkeen massataseeseen ja metaboliittien tunnistamiseen, ellei analyyttisen spesifisyyden herkkyys ole vähintään yhtä hyvä kuin radiomerkin herkkyys ja ellei sillä saada riittäviä massatase- ja metaboliittien tunnistustietoja. Merkinnän tulisi olla molekyylin ydinosassa, ja moninkertainen merkintä voi olla tarpeen metabolisen kohtalon seuraamiseksi (OECD 417).
Radiomerkinnän käyttö voi olla valinnaista, mutta sitä suositellaan esimerkiksi bioakkumulaatiotutkimuksissa, koska se voi helpottaa analyysiä (OECD 305, OECD 315 & 317).
Tritiumia ei useinkaan suositella käytettäväksi (OPPTS 860.1300), sitä ei tule käyttää (SANCO/11187/2013) tai se on kielletty (OECD 507).
14C:tä suositellaan joissakin testeissä (OECD 309).
14C:tä suositellaan joissakin testeissä.