In molti casi l’uso di materiale radiomarcato (PAIRA-Pure Active Ingredient, Radiolabelled) è considerato obbligatorio e la scelta del radiomarcatore è normalmente l’isotopo carbonio-14. In alcuni casi può essere usato il trizio, ma il suo uso è scoraggiato, o addirittura proibito, poiché può verificarsi uno scambio idrogeno-trizio che rende difficile l’interpretazione dei dati.
Ragioni per scegliere il carbonio-14
- Il 14C è l’isotopo normativo di scelta
- Ha una lunga emivitavita – quindi nessun requisito per correggere il decadimento in studi estesi
- Posizione definita dell’etichetta nella struttura centrale della molecola
- I composti possono essere preparati usando la sintesi personalizzata
- Fornisce un metodo altamente sensibile per la rilevazione che è quantitativa & Qualitativo
- Permette di seguire il destino dei genitori e dei metaboliti e di chiarire i percorsi
- Critici controlli di qualità, compresa la BPL, ne supportano l’uso negli studi normativi
Esempi di guida che evidenziano la natura del radiomarcatore e del carbonio14 in particolare:
I radiomarcatori devono essere posizionati in siti (uno o più a seconda delle necessità), per facilitare l’elucidazione delle vie metaboliche e di trasformazione e per facilitare lo studio della distribuzione del principio attivo e dei suoi metaboliti, prodotti di reazione e di degradazione (EU 283/2013).
Sono richiesti dati sul metabolismo insieme a un diagramma schematico delle vie metaboliche nelle piante e negli animali e questi studi devono essere condotti con una o più forme radiomarcate della sostanza attiva e, se del caso, forme stereoisomere della sostanza attiva e dei suoi metaboliti (EU 283/2013).
I radiomarcatori sono richiesti per consentire la quantificazione dei residui totali estraibili e non estratti e il 14C è l’isotopo preferito per gli studi sui residui (OECD 501).
Il materiale marcato con 14C è un prerequisito per alcuni studi (OECD 304A).
L’atomo di 14C dovrebbe trovarsi nella parte più recalcitrante della molecola (OECD 314)
Se il composto ha strutture ad anello, allora condurre esperimenti separatamente su ogni anello con non più di una struttura ad anello marcato in ogni esperimento (OCSPP 850 170 & 1730).
Studi separati che riflettono l’etichettatura di ogni anello saranno normalmente richiesti (OECD 502) se si verifica la scissione della molecola – oltre alla radiolabel, si incoraggia l’uso di isotopi stabili.
Radiolabel può essere preferito per gli studi nel letame, dove l’anello fenilico U-14C è particolarmente preferito, poiché 14C CO2 e 14C volatili come 14CH4 devono essere catturati (EMA/CVMP 2009/430327).
14C dovrebbe essere usato per tutti i bilanci di massa e l’identificazione dei metaboliti a meno che la sensibilità della specificità analitica sia almeno pari alla sensibilità del radiomarcatore e fornisca adeguate informazioni di bilancio di massa e met ID. L’etichetta dovrebbe essere nella porzione centrale della molecola e potrebbe essere necessaria un’etichettatura multipla per seguire il destino metabolico (OECD 417).
L’uso di un radiomarcatore può essere opzionale ma è preferito per esempio negli studi di bioaccumulo in quanto può facilitare l’analisi (OECD 305, OECD 315 & 317).
Il trizio è spesso fortemente sconsigliato (OPPTS 860.1300), non deve essere usato (SANCO/11187/2013) o vietato (OECD 507).
Il 14C è raccomandato in alcuni test (OECD 309).