Zbytek aktivního místa, His(15), v proteinu obsahujícím histidin, HPr, může být nahrazen aspartátem a stále působit jako fosfoakceptor a fosfodonor u enzymu I, resp. enzymu IIA(glukóza). Ostatní záměny, včetně cysteinu, glutamátu, serinu, treoninu a tyrosinu, nevykazovaly žádnou aktivitu. K(m) enzymu I pro His(15) –> Asp HPr se zvyšuje 10krát a V(max) se snižuje 1000krát ve srovnání s HPr divokého typu. Fosforylace Asp(15) vedla ke spontánní vnitřní přestavbě zahrnující ztrátu fosforylové skupiny a molekuly vody, což bylo potvrzeno hmotnostní spektrometrií. Vzniklý proteinový druh měl vyšší pI než His(15) –> Asp HPr, což mohlo vzniknout tvorbou sukcinimidu nebo isoimidu. Hydrolýza izolované formy s vysokým pI poskytla pouze kyselinu asparagovou ve zbytku 15 a nebyla zjištěna žádná kyselina isoasparagová. To naznačuje, že se tvoří spíše isoimid než sukcinimid. V nepřítomnosti fosforylace nebyla zjištěna tvorba formy s vysokým pI, což naznačuje, že fosforylace katalyzuje vznik cyklizace. Možné zapojení Asn(12) do vnitřní cyklizace s Asp(15) bylo vyloučeno mutací Asn(12) –> Ala v His(15) –> AspHPr. Náhrady Asn(12) alaninem, aspartátem, serinem a treoninem v divokém typu HPr naznačily obecný požadavek na zbytky schopné tvořit vodíkovou vazbu s atomem Nepsilon(2) His(15), ale odstranění vodíkové vazby má za následek pouze čtyřnásobné snížení k(cat)/K(m).
Organizační příslušnost: 
Oddělení biochemie, University of Saskatchewan, Saskatoon, Saskatchewan S7N 5E5, Kanada.
Skrýt celý abstrakt