I många fall anses det vara obligatoriskt att använda radiomärkt material (PAIRA-Pure Active Ingredient, Radiolabelled) och valet av radiomärkning är normalt kol-14-isotopen. I vissa fall kan tritium användas, men det avråds från eller är till och med förbjudet, eftersom väte-tritium-utbyte kan förekomma, vilket försvårar tolkningen av data.
Rsaker till valet av kol-14
- 14C är den vanligaste regleringsisotopen
- Den har en lång halva-Livslängd – därmed finns inget krav på att korrigera för nedbrytning vid längre studier
- Definierad(a) märkningsposition(er) i molekylens kärnstruktur
- Föreningar kan framställas med hjälp av skräddarsydd skräddarsydd syntes
- Gör en högkänslig metod för detektion som är kvantitativ. & Kvalitativ
- Gör det möjligt att följa moder- och metaboliternas öde och att belysa vägar
- Kritiska kvalitetskontroller, inklusive GLP, stöder dess användning i regulatoriska studier
Exempel på riktlinjer som belyser radiomärkningens och kolets karaktär.14 specifikt:
Radiomärken ska placeras på platser (en eller flera vid behov), för att underlätta att klarlägga metaboliska och omvandlingsvägar och för att underlätta undersökning av fördelningen av den aktiva substansen och dess metaboliter, reaktions- och nedbrytningsprodukter (EU 283/2013).
Data om metabolism tillsammans med ett schematiskt diagram över metaboliska vägar i växter och djur krävs och dessa studier ska utföras med en eller flera radiomärkta former av det verksamma ämnet och, i förekommande fall, stereoisomera former av det verksamma ämnet och dess metaboliter (EU 283/2013).
Radiomärkningar krävs för att möjliggöra kvantifiering av totala extraherbara och icke-extraherade restsubstanser, och 14C är den isotop som föredras för studier av restsubstanser (OECD 501).
14C-märkt material är en förutsättning för vissa studier (OECD 304A).
14C-atomen bör finnas i den mest reaktiva delen av molekylen (OECD 314)
Om en förening har ringstrukturer, ska experimenten utföras separat för varje ring och inte mer än en ringstruktur ska märkas i varje experiment (OCSPP 850 170 & 1730).
Separata studier som återspeglar märkning av varje ring kommer normalt att krävas (OECD 502) om molekylens klyvning inträffar – förutom radiomärkning uppmuntras användning av stabila isotoper.
Radiomärkning kan vara att föredra för studier i gödsel, där fenylringen U-14C är särskilt att föredra, eftersom 14C CO2 och 14C flyktiga ämnen som 14CH4 måste fångas upp (EMA/CVMP 2009/430327).
14C bör användas för all massbalans och metabolitidentifiering om inte känsligheten för analytisk specificitet är minst lika bra som radiomärkningskänsligheten och ger adekvat information om massbalans och met ID. Märkningen bör finnas i molekylens kärndel och flera märkningar kan vara nödvändiga för att följa det metaboliska ödet (OECD 417).
Användning av en radiomärkning kan vara frivillig men är att föredra t.ex. i bioackumuleringsstudier eftersom det kan underlätta analysen (OECD 305, OECD 315 & 317).
Tritium avråds ofta starkt (OPPTS 860.1300), får inte användas (SANCO/11187/2013) eller är förbjudet (OECD 507).
14C rekommenderas i vissa tester (OECD 309).