I mange tilfælde anses brugen af radiomærket materiale (PAIRA-Pure Active Ingredient, Radiolabelled) for obligatorisk, og valget af radiomærke er normalt kulstof 14-isotopen. I nogle tilfælde kan der anvendes tritium, men det frarådes eller er endog forbudt, da der kan forekomme hydrogen-tritium-udveksling, hvilket gør det vanskeligt at fortolke dataene.
Rejsager for valg af kulstof-14
- 14C er den foretrukne reguleringsisotop
- Den har en lang halveringstid.levetid – derfor er der ikke behov for at korrigere for henfald i udvidede undersøgelser
- Definerede mærkningsposition(er) i molekylets kernestruktur
- Forbindelser kan fremstilles ved hjælp af skræddersyet skræddersyet syntese
- Giver en meget følsom metode til detektion, som er kvantitativ & Kvalitativ
- Giver mulighed for at følge skæbnen for moder- og metabolitter og for at klarlægge veje
- Kritiske kvalitetskontroller, herunder GLP, understøtter dens anvendelse i lovpligtige undersøgelser
Eksempler på vejledninger, der fremhæver arten af radiomærket og kulstof-14 specifikt:
Radiomærker skal placeres på steder (et eller flere efter behov), for at gøre det lettere at klarlægge metaboliske og transformationsveje og for at lette undersøgelsen af fordelingen af det aktive stof og dets metabolitter, reaktions- og nedbrydningsprodukter (EU 283/2013).
Data om metabolisme sammen med et skematisk diagram over metaboliske veje i planter og dyr er påkrævet, og disse undersøgelser skal udføres med en eller flere radiomærkede former af det aktive stof og, hvor det er relevant, stereoisomerformer af det aktive stof og dets metabolitter (EU 283/2013).
Radiomærkninger er påkrævet for at muliggøre kvantificering af de samlede ekstraherbare og ikke-ekstraherbare restkoncentrationer, og 14C er den foretrukne isotop til undersøgelser af restkoncentrationer (OECD 501).
14C-mærket materiale er en forudsætning for visse undersøgelser (OECD 304A).
14C-atomet skal være i den mest realkydelige del af molekylet (OECD 314)
Hvis forbindelsen har ringstrukturer, skal der udføres forsøg separat på hver ring, og der må ikke mærkes mere end én ringstruktur i hvert forsøg (OCSPP 850 170 & 1730).
Særskilte undersøgelser, der afspejler mærkning af hver ring, vil normalt være påkrævet (OECD 502), hvis der sker spaltning af molekylet – ud over radiomærkning tilskyndes til brug af stabile isotoper.
Radiomærkning kan foretrækkes til undersøgelser i gødning, hvor phenylring U-14C er særligt foretrukket, da 14C CO2 og 14C flygtige stoffer som 14CH4 skal fanges (EMA/CVMP 2009/430327).
14C bør anvendes til al massebalance og metabolitidentifikation, medmindre følsomheden af analytisk specificitet er mindst lige så god som radiomærkningsfølsomheden og giver tilstrækkelige massebalance- og met ID-oplysninger. Mærket bør være i molekylets kernedel, og det kan være nødvendigt med flere mærkninger for at følge den metaboliske skæbne (OECD 417).
Brug af et radiomærke kan være valgfrit, men foretrækkes f.eks. i bioakkumuleringsundersøgelser, da det kan lette analysen (OECD 305, OECD 315 & 317).
Tritium frarådes ofte kraftigt (OPPTS 860.1300), må ikke anvendes (SANCO/11187/2013) eller er forbudt (OECD 507).
14C anbefales i nogle forsøg (OECD 309).