W wielu przypadkach użycie materiału radioznakowanego (PAIRA-Pure Active Ingredient, Radiolabelled) jest uważane za obowiązkowe, a wybór radioznakowania jest zwykle izotopem węgla 14. W niektórych przypadkach może być użyty tryt, ale jego użycie jest odradzane lub nawet zabronione, ponieważ może wystąpić wymiana wodór-tryt utrudniająca interpretację danych.
Powody wyboru węgla-14
- 14C jest izotopem regulacyjnym z wyboru
- Ma on długi okres półtrwania – dzięki czemu nie ma wymogu korygowania danych.życia – dlatego nie ma wymogu korygowania rozpadu w rozszerzonych badaniach
- Zdefiniowana pozycja(-e) etykiety w głównej strukturze cząsteczki
- Związki mogą być przygotowane przy użyciu dostosowanej syntezy na zamówienie
- Dostarcza wysoce czułą metodę detekcji, która jest Ilościowa & Jakościowa
- Pozwala na śledzenie losów związku macierzystego i metabolitów oraz objaśnianie szlaków
- Krytyczne kontrole jakości, w tym GLP, wspierają jej zastosowanie w badaniach regulacyjnych
Przykłady wytycznych, które podkreślają charakter radioznacznika i węgla- 1414 w szczególności:
Znaki radiowe umieszcza się w miejscach (jedno lub więcej w zależności od potrzeb), aby ułatwić wyjaśnienie szlaków metabolizmu i przemian oraz ułatwić badanie rozmieszczenia substancji czynnej i jej metabolitów, produktów reakcji i rozpadu (UE 283/2013).
Wymagane są dane dotyczące metabolizmu wraz ze schematem szlaków metabolicznych u roślin i zwierząt, a badania te przeprowadza się z użyciem co najmniej jednej formy substancji czynnej znakowanej radioaktywnie oraz, w stosownych przypadkach, form stereoizomerycznych substancji czynnej i jej metabolitów (UE 283/2013).
Znaki radiowe są wymagane, aby umożliwić ilościowe określenie całkowitych ekstrahowalnych i nieekstrahowanych pozostałości, a 14C jest preferowanym izotopem do badań pozostałości (OECD 501).
Materiał znakowany 14C jest warunkiem wstępnym dla niektórych badań (OECD 304A).
Atom 14C powinien znajdować się w najbardziej opornej części cząsteczki (OECD 314)
Jeśli związek ma struktury pierścieniowe, to należy przeprowadzać doświadczenia oddzielnie na każdym pierścieniu, z nie więcej niż jedną strukturą pierścieniową znakowaną w każdym doświadczeniu (OCSPP 850 170 & 1730).
Odrębne badania odzwierciedlające znakowanie każdego pierścienia będą zwykle wymagane (OECD 502), jeżeli nastąpi rozszczepienie cząsteczki – oprócz znakowania radiologicznego zachęca się do stosowania stabilnych izotopów.
Znakowanie radiologiczne może być preferowane w przypadku badań w oborniku, gdzie szczególnie preferowany jest pierścień fenylowy U-14C, ponieważ należy wychwycić 14C CO2 i 14C lotne substancje, takie jak 14CH4 (EMA/CVMP 2009/430327).
14C powinno być stosowane do wszystkich bilansów masowych i identyfikacji metabolitów, chyba że czułość swoistości analitycznej jest co najmniej tak dobra jak czułość radioznakowania i zapewnia odpowiedni bilans masowy i informacje met ID. Oznakowanie powinno znajdować się w głównej części cząsteczki, a wielokrotne oznakowanie może być konieczne do śledzenia losów metabolicznych (OECD 417).
Użycie oznakowania radiowego może być opcjonalne, ale jest preferowane na przykład w badaniach bioakumulacji, ponieważ może ułatwić analizę (OECD 305, OECD 315 & 317).
Tryt jest często zdecydowanie odradzany (OPPTS 860.1300), nie należy go stosować (SANCO/11187/2013) lub jest zabroniony (OECD 507).
14C jest zalecany w niektórych badaniach (OECD 309).
.