Abstract
5-5′’-Dithio-bis(2-nitrobenzoëzuur) (DTNB of Ellman’s reagens; ref. 1) reageert met de vrije sulfhydrylzijketen van cysteïne om een S-S binding te vormen tussen het eiwit en een thionitrobenzoëzuur (TNB) residu. De modificatie is in het algemeen snel en selectief. Het belangrijkste voordeel van DTNB boven alternatieve reagentia (b.v. N-ethylmaleimide of iodoacetamide) is de selectiviteit van dit reagens en de mogelijkheid om het verloop van de reactie spectrofotometrisch te volgen. De reactie wordt gewoonlijk uitgevoerd bij pH 7,0-8,0 en de modificatie is stabiel onder oxidatieve omstandigheden. De TNB-groep kan van het gemodificeerde eiwit worden losgemaakt door behandeling met reagentia die routinematig worden gebruikt om S-S-bindingen te reduceren, bijvoorbeeld mercaptoethanol, of met kaliumcyanide (2) (zie noot 1). Bovendien kunnen de vaak zeer uitgesproken verschillen in reactiviteit van verschillende cysteïnezijketens in hetzelfde eiwit of zelfs actieve site, en de beschikbaarheid van een verscheidenheid van thiol-modificerende reagentia worden benut om selectief te wijzigen cysteïnezijketens in eiwitten in de aanwezigheid van andere, meer reactieve cysteïneresiduen (3).