Abstract
5-5′’-Ditio-bis(2-nitrobentsoehappo) (DTNB tai Ellmanin reagenssi; viite 1) reagoi kysteiinin vapaan sulfhydryylisivuketjun kanssa muodostaen S-S-sidoksen valkuaisen ja tionitrobentsoehappojäännöksen välillä. Modifiointi on yleensä nopea ja selektiivinen. DTNB:n tärkein etu vaihtoehtoisiin reagensseihin (esim. N-etyylimaleimidiin tai jodoasetamidiin) verrattuna on tämän reagenssin selektiivisyys ja mahdollisuus seurata reaktion kulkua spektrofotometrisesti. Reaktio suoritetaan yleensä pH-arvossa 7,0-8,0, ja modifikaatio on stabiili hapettavissa olosuhteissa. TNB-ryhmä voidaan vapauttaa modifioidusta proteiinista käsittelemällä sitä reagensseilla, joita käytetään rutiininomaisesti S-S-sidosten pelkistämiseen, esimerkiksi merkaptoetanolilla, tai kaliumsyanidilla (2) (ks. huomautus 1). Lisäksi samassa proteiinissa tai jopa aktiivisessa paikassa olevien eri kysteiinisivuketjujen reaktiivisuuden usein hyvin selviä eroja ja erilaisten tiolia modifioivien reagenssien saatavuutta voidaan hyödyntää proteiinien kysteiinisivuketjujen valikoivaan modifiointiin muiden, reaktiivisempien kysteiinijäämien läsnä ollessa (3).