Abstract
5-5′’-Dithio-bis(2-nitrobenzoesyra) (DTNB eller Ellmans reagens; ref. 1) reagerar med den fria sulfhydrylsidekedjan hos cystein för att bilda en S-S-bindning mellan proteinet och en thionitrobenzoesyrarest (TNB). Modifieringen är i allmänhet snabb och selektiv. Den största fördelen med DTNB jämfört med alternativa reagenser (t.ex. N-etylmaleimid eller jodoacetamid) ligger i reagensets selektivitet och i möjligheten att följa reaktionsförloppet spektrofotometriskt. Reaktionen utförs vanligen vid pH 7,0-8,0 och modifieringen är stabil under oxidativa förhållanden. TNB-gruppen kan frigöras från det modifierade proteinet genom behandling med reagenser som rutinmässigt används för att reducera S-S-bindningar, t.ex. mercaptoetanol, eller med kaliumcyanid (2) (se not 1). Dessutom kan de ofta mycket uttalade skillnaderna i reaktivitet hos olika cysteinsidokedjor i samma protein eller till och med i en aktiv plats och tillgången till en mängd olika tiolmodifierande reagenser utnyttjas för att selektivt modifiera cysteinsidokedjor i proteiner i närvaro av andra, mer reaktiva cysteinrester (3).