Abstract
5-5′’-Ditio-bis(acid 2-nitrobenzoic) (DTNB sau reactivul lui Ellman; ref. 1) reacționează cu lanțul lateral sulfhidrilic liber al cisteinei pentru a forma o legătură S-S între proteină și un rest de acid thionitrobenzoic (TNB). Modificarea este, în general, rapidă și selectivă. Principalul avantaj al DTNB față de reactivi alternativi (de exemplu, N-etilmaleimida sau iodoacetamida) constă în selectivitatea acestui reactiv și în capacitatea de a urmări cursul reacției pe cale spectrofotometrică. Reacția se realizează de obicei la pH 7,0-8,0, iar modificarea este stabilă în condiții de oxidare. Grupa TNB poate fi eliberată din proteina modificată prin tratare cu reactivi care sunt utilizați în mod obișnuit pentru reducerea legăturilor S-S, de exemplu, mercaptoetanol, sau cu cianură de potasiu (2) (a se vedea nota 1). În plus, diferențele adesea foarte pronunțate de reactivitate ale diferitelor lanțuri laterale de cisteină din aceeași proteină sau chiar din același situs activ, precum și disponibilitatea unei varietăți de reactivi modificatori de tiol pot fi exploatate pentru a modifica selectiv lanțurile laterale de cisteină din proteine în prezența altor reziduuri de cisteină mai reactive (3).
.