Etichetele de fuziune – secvențe de aminoacizi care sunt codificate genetic pentru a fi exprimate ca părți atașate la o proteină – au potențialul de a spori activitatea enzimei native, să permită purificarea specifică a enzimei și să promoveze imobilizarea simplă și eficientă a enzimelor pe suporturi materiale. În această lucrare, demonstrăm efectul unei etichete de fuziune Strep-tag II asupra proprietăților lipazei B din Candida antarctica (CALB) libere și imobilizate. Gena care codifică porțiunea matură a CALB a fost optimizată din punct de vedere al codonului și clonată în plasmidă pASG-IBA2 pentru exprimare în E. coli. CALB recombinant Strep-tag II purificat a fost imobilizat pe un suport pe bază de Strep-Tactin prin legare prin afinitate, iar CALB imobilizat și CALB Strep-tag II liber au fost comparate cu un CALB comercial. În urma modificării, enzima a putut fi purificată în mod selectiv din mediile de cultură, fără nicio legătură nespecifică observabilă. Eficiența catalitică a enzimei purificate cu marcaj de fuziune a fost semnificativ mai mare decât cea a CALB-ului comercial în forma sa liberă. Imobilizarea enzimei marcate prin fuziune pe un suport de agaroză reticulată modificată cu Strep-Tactin a produs o enzimă activă din punct de vedere catalitic; cu toate acestea, kcat-ul enzimei imobilizate a fost semnificativ redus în comparație cu cel al enzimei marcate libere. Această lucrare indică faptul că o etichetă de fuziune Strep-tag II la extremitatea C-terminală poate fi utilizată pentru a îmbunătăți eficiența catalitică a CALB liber, dar este posibil să nu fie potrivită pentru aplicații imobilizate care utilizează legarea enzimei la un suport modificat cu Strep-Tactină.
.