Fusion tags – sequências de aminoácidos que são codificados geneticamente para serem expressos como moieties ligados a uma proteína – têm o potencial de aumentar a actividade da enzima nativa, permitir a purificação específica da enzima e promover a imobilização simples e eficiente das enzimas nos suportes materiais. Neste trabalho, demonstramos o efeito de uma etiqueta de fusão Strep-tag II sobre as propriedades da lipase B livre e imobilizada da Candida antárctica (CALB). O gene que codifica a porção madura de CALB foi otimizado para códon e clonado no plasmídeo pASG-IBA2 para expressão em E. coli. O Strep-tag II CALB recombinante purificado foi imobilizado ao suporte baseado em Strep-Tactin através da ligação por afinidade, e o Strep-tag II CALB imobilizado e livre foi comparado a um CALB comercial. Após a modificação, a enzima pôde ser purificada selectivamente a partir de meios de cultura sem ligação não específica observável. A eficiência catalítica da enzima de fusão purificada foi significativamente maior do que a do CALB comercial na sua forma livre. A imobilização da enzima marcada por fusão ao suporte de agarose reticulada modificada Strep-Tactin produziu uma enzima catalítica ativa; entretanto, o kcat da enzima imobilizada foi significativamente reduzido em comparação com a enzima marcada livre. Este trabalho indica que um tag de fusão C-terminus Strep-tag II pode ser empregado para melhorar a eficiência catalítica do CALB livre, mas pode não ser adequado para aplicações imobilizadas que empregam a ligação da enzima a um suporte modificado com Strep-Tactin.

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