Abstract
5-5′’-Dithio-bis(ácido 2-nitrobenzóico) (DTNB ou reagente de Ellman; ref. 1) reage com a cadeia lateral sulfidrílica livre de cisteína para formar uma ligação S-S entre a proteína e um resíduo de ácido tionitrobenzóico (TNB). A modificação é geralmente rápida e seletiva. A principal vantagem do DTNB em relação aos reagentes alternativos (por exemplo, N-etilmaleimida ou iodoacetamida) está na selectividade deste reagente e na capacidade de seguir espectofotometricamente o curso da reacção. A reacção é normalmente realizada a pH 7,0-8,0 e a modificação é estável sob condições oxidativas. O grupo TNB pode ser liberado da proteína modificada por tratamento com reagentes que são rotineiramente utilizados para reduzir as ligações S-S, por exemplo, mercaptoetanol, ou por cianeto de potássio (2) (ver Nota 1). Além disso, as diferenças frequentemente pronunciadas na reatividade de diferentes cadeias laterais de cisteína na mesma proteína ou mesmo no mesmo local ativo, e a disponibilidade de uma variedade de reagentes modificadores de tiol podem ser exploradas para modificar seletivamente as cadeias laterais de cisteína em proteínas na presença de outros resíduos de cisteína mais reativos (3).