Fusion tags – amino acid sequences that are genetically coded to be expressed as attached moieties to a protein – have the potential to enhance the activity of native enzyme, umożliwiać specyficzne oczyszczanie enzymów oraz promować prostą i wydajną immobilizację enzymów na nośnikach materiałowych. W niniejszej pracy wykazano wpływ znacznika fuzyjnego Strep-tag II na właściwości wolnej i immobilizowanej lipazy B z Candida antarctica (CALB). Gen kodujący dojrzałą część CALB został zoptymalizowany kodonowo i sklonowany w plazmidzie pASG-IBA2 w celu ekspresji w E. coli. Oczyszczony rekombinowany Strep-tag II CALB został unieruchomiony na podłożu Strep-Tactin poprzez wiązanie powinowactwa, a unieruchomiony i wolny Strep-tag II CALB porównano z komercyjnym CALB. Po modyfikacji, enzym mógł być selektywnie oczyszczany z podłoża hodowlanego bez obserwowalnego wiązania niespecyficznego. Wydajność katalityczna oczyszczonego enzymu znakowanego fuzją była znacząco wyższa niż komercyjnego CALB w jego wolnej formie. Immobilizacja enzymu znakowanego fuzyjnie do zmodyfikowanego Strep-Taktyną, usieciowanego podłoża agarozowego pozwoliła na uzyskanie katalitycznie aktywnego enzymu, jednakże kcat immobilizowanego enzymu był znacząco obniżony w porównaniu z wolnym enzymem znakowanym. Praca ta wskazuje, że znacznik fuzyjny C-terminus Strep-tag II może być stosowany w celu poprawy wydajności katalitycznej wolnego CALB, ale może nie być odpowiedni do zastosowań immobilizowanych, które wykorzystują wiązanie enzymu do podłoża modyfikowanego Strep-Taktyną.

Articles

Dodaj komentarz

Twój adres e-mail nie zostanie opublikowany.