Abstract
5-5′’-Dithio-bis(2-nitrobenzoic acid) (DTNB lub odczynnik Ellmana; ref. 1) reaguje z wolnym sulfhydrylowym łańcuchem bocznym cysteiny tworząc wiązanie S-S pomiędzy białkiem a resztą kwasu tionitrobenzoesowego (TNB). Modyfikacja jest na ogół szybka i selektywna. Główna przewaga DTNB nad alternatywnymi odczynnikami (np. N-etylomaleimidem lub jodoacetamidem) polega na selektywności tego odczynnika oraz na możliwości śledzenia przebiegu reakcji spektrofotometrycznie. Reakcję prowadzi się zwykle w pH 7,0-8,0, a modyfikacja jest stabilna w warunkach utleniających. Grupa TNB może zostać uwolniona ze zmodyfikowanego białka przez traktowanie odczynnikami, które są rutynowo stosowane do redukcji wiązań S-S, na przykład merkaptoetanolem lub cyjankiem potasu (2) (patrz uwaga 1). Ponadto, często bardzo wyraźne różnice w reaktywności różnych łańcuchów bocznych cysteiny w tym samym białku lub nawet miejscu aktywnym oraz dostępność różnych odczynników modyfikujących tiole mogą być wykorzystane do selektywnej modyfikacji łańcuchów bocznych cysteiny w białkach w obecności innych, bardziej reaktywnych reszt cysteiny (3).
.