Abstract
5-5′’-Dithio-bis(2-nitrobenzoesyre) (DTNB eller Ellman-reagens; ref. 1) reagerer med den frie sulfhydrylsidekæde af cystein for at danne en S-S-binding mellem proteinet og en thionitrobenzoesyre (TNB)-rest. Modifikationen er generelt hurtig og selektiv. Den største fordel ved DTNB i forhold til alternative reagenser (f.eks. N-ethylmaleimid eller iodoacetamid) ligger i dette reagens’ selektivitet og i muligheden for at følge reaktionsforløbet spektrofotometrisk. Reaktionen udføres normalt ved pH 7,0-8,0, og modifikationen er stabil under oxidative forhold. TNB-gruppen kan frigøres fra modificeret protein ved behandling med reagenser, der rutinemæssigt anvendes til at reducere S-S-bindinger, f.eks. mercaptoethanol, eller med kaliumcyanid (2) (se note 1). Desuden kan de ofte meget udtalte forskelle i reaktivitet mellem forskellige cysteinsidekæder i det samme protein eller endog aktive sted og tilgængeligheden af en række thiol-modificerende reagenser udnyttes til selektivt at modificere cysteinsidekæder i proteiner i tilstedeværelse af andre, mere reaktive cysteinrester (3).