Abstract
5-5′’-Ditio-bis(acido 2-nitrobenzoico) (DTNB o reagente di Ellman; rif. 1) reagisce con la catena laterale sulfidrilica libera della cisteina per formare un legame S-S tra la proteina e un residuo di acido tionitrobenzoico (TNB). La modifica è generalmente rapida e selettiva. Il vantaggio principale del DTNB rispetto a reagenti alternativi (per esempio, N-etilmaleimide o iodoacetamide) è nella selettività di questo reagente e nella capacità di seguire il corso della reazione spettrofotometricamente. La reazione viene solitamente eseguita a pH 7.0-8.0 e la modifica è stabile in condizioni ossidative. Il gruppo TNB può essere rilasciato dalla proteina modificata mediante trattamento con reagenti che sono abitualmente utilizzati per ridurre i legami S-S, per esempio, mercaptoetanolo, o mediante cianuro di potassio (2) (vedi nota 1). Inoltre, le differenze spesso molto pronunciate nella reattività delle diverse catene laterali di cisteina nella stessa proteina o anche sito attivo, e la disponibilità di una varietà di reagenti che modificano il tiolo possono essere sfruttati per modificare selettivamente le catene laterali di cisteina nelle proteine in presenza di altri residui di cisteina più reattivi (3).