Abstract
5-5′’-Ditio-bisz(2-nitrobenzoesav) (DTNB vagy Ellman-reagens; hivatkozás 1) a cisztein szabad szulfhidril-oldalláncával reagálva S-S kötést hoz létre a fehérje és egy tionitrobenzoesav (TNB) maradék között. A módosítás általában gyors és szelektív. A DTNB fő előnye az alternatív reagensekkel (pl. N-etilmaleimid vagy jodoacetamid) szemben a reagens szelektivitásában és abban rejlik, hogy a reakció lefolyása spektrofotometriásan követhető. A reakciót általában pH 7,0-8,0-nál végzik, és a módosítás oxidatív körülmények között is stabil. A TNB-csoport felszabadítható a módosított fehérjéből az S-S kötések redukciójára rutinszerűen használt reagensekkel, például merkaptoetanollal, vagy kálium-cianiddal (2 ) történő kezeléssel (lásd 1. megjegyzés). Ezenkívül a különböző cisztein-oldalláncok reakcióképessége közötti, gyakran igen kifejezett különbségek ugyanazon fehérjében vagy akár aktív helyen, valamint a különféle tiol-módosító reagensek elérhetősége kihasználható a fehérjék cisztein-oldalláncainak szelektív módosítására más, reaktívabb cisztein-maradványok jelenlétében (3).
.