Abstract
5-5′’-Dithio-bis(acide 2-nitrobenzoïque) (DTNB ou réactif d’Ellman ; réf. 1) réagit avec la chaîne latérale sulfhydryle libre de la cystéine pour former une liaison S-S entre la protéine et un résidu d’acide thionitrobenzoïque (TNB). La modification est généralement rapide et sélective. Le principal avantage du DTNB par rapport aux autres réactifs (par exemple, le N-éthylmaléimide ou l’iodoacétamide) réside dans la sélectivité de ce réactif et dans la possibilité de suivre le déroulement de la réaction par spectrophotométrie. La réaction est généralement réalisée à pH 7,0-8,0 et la modification est stable dans des conditions d’oxydation. Le groupe TNB peut être libéré de la protéine modifiée par traitement avec des réactifs qui sont couramment utilisés pour réduire les liaisons S-S, par exemple le mercaptoéthanol, ou par le cyanure de potassium (2) (voir note 1). En outre, les différences souvent très prononcées de réactivité des différentes chaînes latérales de cystéine dans la même protéine ou même le site actif, et la disponibilité d’une variété de réactifs modificateurs de thiol peuvent être exploitées pour modifier sélectivement les chaînes latérales de cystéine dans les protéines en présence d’autres résidus de cystéine plus réactifs (3).