V mnoha případech je použití radioaktivně značeného materiálu (PAIRA-Pure Active Ingredient, Radiolabelled) považováno za povinné a volba radioaktivní značky je obvykle izotop uhlíku 14. V některých případech lze použít tritium, ale jeho použití se nedoporučuje, nebo je dokonce zakázáno, protože může dojít k výměně vodíku s tritiem, což ztěžuje interpretaci údajů.
Důvody pro volbu izotopu uhlíku-14
- 14C je regulační izotop volby
- Má dlouhý poločas rozpadu.životnost – proto není třeba korigovat rozpad v rozsáhlých studiích
- Definovaná pozice značky v jádrové struktuře molekuly
- Sloučeniny lze připravit pomocí vlastní syntézy na míru
- Poskytuje vysoce citlivou metodu detekce, která je kvantitativní. & Kvalitativní
- Umožňuje sledovat osud mateřských látek a metabolitů a objasnit dráhy
- Kritické kontroly kvality včetně SLP podporují její použití v regulačních studiích
Příklady pokynů, které zdůrazňují povahu radioaktivní značky a uhlík-14 konkrétně:
Radioznačky se umísťují na místa (jedno nebo více podle potřeby), aby se usnadnilo objasnění metabolických a transformačních cest a usnadnilo zkoumání distribuce účinné látky a jejích metabolitů, reakčních a rozkladných produktů (EU 283/2013).
Požadují se údaje o metabolismu spolu se schématem metabolických drah u rostlin a zvířat a tyto studie se provádějí s jednou nebo více radioaktivně značenými formami účinné látky a případně stereoizomerními formami účinné látky a jejích metabolitů (EU 283/2013).
Radioaktivní značení se vyžaduje, aby bylo možné kvantifikovat celková extrahovatelná a neextrahovatelná rezidua, a pro studie reziduí se upřednostňuje izotop 14C (OECD 501).
Materiál značený 14C je nezbytnou podmínkou pro některé studie (OECD 304A).
Atom 14C by měl být v nejvíce rekalcitabilní části molekuly (OECD 314)
Pokud má sloučenina kruhovou strukturu, pak provádějte experimenty zvlášť na každém kruhu, přičemž v každém experimentu nesmí být značena více než jedna kruhová struktura (OCSPP 850 170 & 1730).
Obvykle se budou vyžadovat oddělené studie odrážející značení každého kruhu (OECD 502), pokud dojde ke štěpení molekuly – kromě radioaktivního značení se doporučuje použití stabilních izotopů.
Radioaktivní značení lze upřednostnit pro studie v hnojivu, kde se upřednostňuje zejména fenylový kruh U-14C, protože je třeba zachytit 14C CO2 a 14C těkavé látky, jako je 14CH4 (EMA/CVMP 2009/430327).
14C by měl být používán pro veškerou hmotnostní bilanci a identifikaci metabolitů, pokud citlivost analytické specifičnosti není alespoň tak dobrá jako citlivost radioaktivní značky a neposkytuje odpovídající informace o hmotnostní bilanci a met ID. Značka by měla být v jádrové části molekuly a pro sledování metabolického osudu může být nutné vícenásobné značení (OECD 417).
Použití radioaktivní značky může být volitelné, ale upřednostňuje se například ve studiích bioakumulace, protože může usnadnit analýzu (OECD 305, OECD 315 & 317).
Tritium se často důrazně nedoporučuje (OPPTS 860.1300), nemá se používat (SANCO/11187/2013) nebo je zakázáno (OECD 507).
14C se doporučuje v některých testech (OECD 309).
Tritium se doporučuje v některých testech (OECD 309).