A miniaturização de ensaios de triagem de alto rendimento (HTS) tem sido uma estratégia amplamente debatida e pesquisada com o objetivo de reduzir os custos de triagem e aumentar a velocidade, sem comprometer a qualidade dos dados. Neste contexto, as tecnologias de manuseio de líquidos continuam a ser melhoradas. Um novo e promissor desenvolvimento é o surgimento de dispensadores de nanolitros, capazes de transferir diretamente os compostos para as microplacas de ensaio. Neste estudo, investigamos a miniaturização de um ensaio de cinase HTS e comparamos o desempenho real da atual tecnologia de transferência de deslocamento de ar de última geração (MiniTrak V System) e um dispensador capilar de nanolitro (CyBi-HummingWell). A robustez e eficácia dos formatos do ensaio miniaturizado foram comparadas através do teste de staurosporina para gerar curvas dose-resposta e 340 compostos ativos previamente identificados. Usando o dispositivo MiniTrak, a miniaturização do ensaio foi alcançada de 18 microL para 6 microL nos formatos de 384 poços e 1536 poços em placas. Utilizando o dispensador de nanolitros, a miniaturização foi realizada até 5 microL em placas de 1536 poços. Os fatores Z’ obtidos para cada formato de ensaio foram consistentemente acima de 0,5. Os dados aqui apresentados descrevem a reprodutibilidade dos resultados obtidos com as duas tecnologias de transferência e destacam possíveis problemas para a identificação de acertos.