Os estafilocococos são um dos patógenos mais comuns isolados das infecções nosocomiais e adquiridas na comunidade. Antibióticos como clindamicina e eritromicina têm sido opções úteis no tratamento de infecções de pele e tecidos moles causadas por estafilococos. No entanto, a expressão da resistência à macrolide-lincosamida-estreptogramina B (MLSB) pode limitar a eficácia destes medicamentos. Os objetivos deste estudo foram investigar a prevalência e os fenótipos da resistência MLSB em cepas de estafilococos isoladas de amostras clínicas e determinar a atividade telitromicina contra estes isolados. Um total de 218 cepas isoladas de diferentes amostras clínicas (ferida, abscesso, sangue, fluidos corporais estéreis, cateter, amostras do trato respiratório superior) entre fevereiro de 2011 e dezembro de 2012 foram incluídas no estudo. Os isolados foram identificados usando métodos convencionais e sistema automatizado de identificação bacteriana (BD Phoenix 100™ System, Becton Dickinson, EUA). A resistência à meticilina dos isolados foi determinada com o uso de disco de cefoxitina (30 µg) e a actividade telitromicina (15 µg) foi detectada pelo método de difusão do disco de Kirby-Bauer. Os fenótipos de resistência MLSB foram investigados pelo método de teste D usando discos de eritromicina (15 µg) e clindamicina (2 µg). Dos 92 isolados de S.aureus, 23 eram resistentes à meticilina (MRSA) e 69 eram sensíveis à meticilina (MSSA), enquanto 78 dos 126 isolados do SNC eram resistentes à meticilina (MRCNS) e 48 eram sensíveis à meticilina (MSCNS). Cento e setenta e dois (79%) isolados foram encontrados como resistentes à eritromicina, e as taxas de resistência à eritromicina em cepas de MRSA, MSSA, MRCNS e MSCNS foram 83%, 71%, 95% e 63%, respectivamente. A resistência induzível do tipo MLSB (tipo iMLSB) foi observada em 26%, 6%, 51% e 33%; a resistência cromossômica (tipo cMLSB) em 32%, 27%, 27% e 17% e a resistência ligada à bomba de efluxo (tipo MSB) em 42%, 67%, 22% e 50% das cepas de MRSA, MSSA, MRCNS e MSCNS, respectivamente. Quarenta e quatro (20%) cepas foram encontradas susceptíveis tanto à clindamicina como à eritromicina (resistência tipo S). A resistência devido à inativação enzimática (tipo L) foi observada apenas em duas das cepas do SNC (0,9%), uma era resistente à meticilina e a outra era suscetível. A resistência telitromicina total foi detectada em 26,6% (n= 58), enquanto as taxas de resistência em isolados de MRSA, MSSA, MRCNS e MSKNS foram de 35%, 35%, 28% e 8%, respectivamente. A taxa de resistência à telitromicina foi de 34% (58/172) nos isolados resistentes à eritromicina. Entretanto, todos os isolados sensíveis à eritromicina (n= 46) também foram suscetíveis à telitromicina. Os isolados resistentes à telitromicina apresentaram frequentemente o fenótipo cMLSB (39/44; 67,2%), seguidos pela MSB (16/72; 27,6%) e iMLSB (3/56; 5,2%). Em conclusão, a clindamicina ainda é um antibiótico eficaz para o tratamento das infecções estafilocócicas em nosso hospital, entretanto, a taxa de resistência à telitromicina de 34% pode limitar o uso deste agente, que é uma alternativa para o tratamento de infecções causadas por clindamicina e cepas resistentes à eritromicina.