4.04.4.2 Aroma e Contaminantes de Peixe
Dentre as aplicações das técnicas de extracção volátil, um método rápido e fácil para determinar alguns contaminantes como os níveis de resíduos de 2-fenoxietanol nos tecidos e plasma sanguíneo dos peixes foi desenvolver48 e, subsequentemente, usar o método para monitorizar a dinâmica dos resíduos de 2-fenoxietanol nos peixes tratados com anestesia.
O 2-fenoxietanol (éter monofenílico de etilenoglicol, C8H10O2) é um agente anestésico promissor usado em pescas e aquacultura.
Foi desenvolvido um novo procedimento que emprega a microextracção em fase sólida (SPME) do analito alvo a partir do headspace da amostra, seguido da cromatografia gasosa espectrometria de massa (GC-MS).48 Tanto o manuseio da amostra, visando a transferência máxima de 2-fenoxietanol para o headspace, quanto as condições SPME-GC-MS foram cuidadosamente otimizadas.
Para a otimização, diferentes condições de preparação da amostra e SPME foram testadas.48
As amostras de tecido de peixes não expostos ao 2-fenoxietanol foram usadas para desenvolver e caracterizar o método SPME. Amostras pontiagudas sem modificação da matriz foram preparadas da seguinte forma: 5 μl de padrões de trabalho foi adicionado a 2 g de tecido de peixe moído para obter um nível final de spiking de 3-382 mg kg-1.
Subsequentemente, várias modificações de matriz alternativas foram testadas: (I) 2 g de tecido com picos ou tecido com resíduos incorridos foram transferidos para um frasco de 10 ml de headspace (HS), ao qual foram adicionados 2 ml de água ultra pura; (II) 2 g de tecido com resíduos incorridos foram triturados com 2 g de sulfato de sódio; e (III) 2 g de tecido com resíduos incorridos foram triturados com 2 g de sulfato de sódio e depois imersos em 3 ml de água ultra pura em um frasco HS de 10 ml. Todas as amostras modificadas foram agitadas vigorosamente por 20 minutos antes da análise SPME.
Para identificar a fibra mais eficiente para a extração do analito, três fibras SPME disponíveis comercialmente (PA, PDMS/CAR/DVB, e CW/DVB), com seletividade de fase estacionária diferente, foram avaliadas. Um tecido de peixe (não modificado) com um nível de 33 mg kg-1 serviu como controle nestes experimentos de teste de fibra.
Todas as extrações foram realizadas sob as mesmas condições (60 minutos de sorção a 30 °C). Resultados insatisfatórios da eficiência de extração (baseados na resposta do detector, ou seja, comparação sinal/ruído) foram obtidos usando fibras PA e CWX/DVB. A fibra mista PDMS/CAR/DVB produziu os melhores resultados e por isso foi empregada em nossos experimentos subseqüentes.
Experimentos focados na dinâmica da extração do 2-fenoxietanol foram conduzidos com tempos de extração de 5, 15, 30, 40 e 60 min a 30 °C. As experiências foram realizadas usando amostras de tecido de peixe com espigões a um nível de 1 mg kg-1. A quantidade de analito extraído aumentou continuamente ao longo do intervalo de tempo de extracção. Para manter a produção de amostras de laboratório a um nível aceitável, não foi considerado qualquer outro aumento no tempo de extracção. O tempo de extração de 60 min foi escolhido para análises adicionais.
Usando uma fibra de divinilbenzeno/Carboxen/polidimetilsiloxano (PDMS/CAR/DVB) para preparação de amostra de 60 min a 30 °C e um detector de íons operado em modo MS/MS, Klimancova et al.48 obtiveram limites de detecção (LOD) e quantificação (LOQ) de 0,03 e 0,1 mg kg-1 de amostra, respectivamente. O método foi linear numa faixa de 0,1-250 mg kg-1 e, dependendo da matriz da amostra e do nível de pico, foi obtida uma repetibilidade (expressa como desvio padrão relativo, R.S.D.) entre 3 e 11%.48
Compostos orgânicos de mercúrio, dos quais o metilmercúrio é o mais comum, são de especial preocupação devido à sua maior toxicidade. Em resposta à crescente demanda, várias técnicas analíticas foram desenvolvidas ao longo da última década para especializar organomercurials em amostras biológicas.
Recentemente, a microextração de fase sólida (SPME) tornou-se uma técnica amplamente difundida e livre de solventes para a determinação de GC de organometálicos. A SPME não só oferece a possibilidade de um sistema rápido, sem solventes, integrado de extracção de amostras por indução de amostras, como também pode proporcionar uma melhor pré-concentração do analito do que as técnicas de extracção líquido-líquido (LLE). Além disso, ao aplicar a técnica de preparação de amostras por headspace (HS), também pode ser realizada a separação da matriz com base nas diferenças de volatilidade da substância a analisar e de outros compostos presentes na solução da amostra. Deve-se notar, entretanto, que outros métodos integrados de extração-preconcentração sem solventes, ou seja, aqueles que aplicam a técnica de purga e extração por adsorção de barras (SBSE), também são alternativas atraentes à SPME para várias determinações organometálicas.
A aplicação de um método analítico econômico (sistema SPME-GC pirólise – AFS) para a determinação do MeHg em amostras de frutos do mar típicas da dieta foi proposta.49 O estudo concentrou-se na investigação das modificações necessárias para métodos bem estabelecidos envolvendo digestão alcalina a fim de utilizar fenilação em fase aquosa e preparação de amostras SPME para analisar amostras de alimentos com matrizes complexas contendo MeHg na faixa de 100 ng g-1,
Procedimento de preparação de amostras: 250 mg de amostra liofilizada e triturada ou material de referência do certificado (CRM) foi pesado com precisão em um frasco de vidro limpo de 30 ml, e 5-6 ml de 25% (p/v) de KOH em metanol ou 18% (p/v) de NaOH em metanol foram adicionados (ambos foram 4,5 M). O frasco foi então selado com uma tampa de rosca revestida de PTFE e colocado em banho ultra-sónico durante 3 h a 75 °C. Após o frasco ter sido deixado arrefecer até à temperatura ambiente, o procedimento variou consoante o teor de MeHg da amostra. No caso de amostras de alto teor (contendo algumas μg-1 MeHg com base no peso seco), todo o digerido foi completamente enxaguado em um frasco volumétrico de 50 ml. Dessa solução, 1 ml foi pipetado para um balão volumétrico de 10 ml.
Se o método de adição padrão fosse utilizado, 1 ml de MeHgCl padrão aquoso também foi adicionado à solução antes de ser diluído até o volume nominal. Os níveis de adição padrão corresponderam ao resultado 1×, 2× ou 4× da concentração esperada do analito da solução da amostra.
No caso de amostras de baixo conteúdo (contendo apenas cerca de 100 ng g-1 MeHg ou menos), após o frasco ter sido deixado esfriar até a temperatura ambiente, o digestivo foi agitado por alguns segundos, e então 5 ml foram pipetados para um frasco de centrifugação de vidro de 6 ml. A solução foi centrifugada durante 15 min a 4100 g e 20 °C. Do sobrenadante, 1 ml foi transferido para um frasco volumétrico de 10 ml e o método de adição padrão foi realizado como descrito acima.
Em ambos os casos, 1 ml das soluções 10 ml diluídas (e perfuradas) foi pipetado em frascos de vidro de 30 ml, cada um contendo 10 ml de um tampão de 1 M, pH = 5 acetato. Nesse momento, uma barra de agitação limpa revestida com PTFE foi colocada dentro do frasco. Finalmente, foi adicionado 1 ml de NaBPh4 a 1% de NaBPh recentemente preparado, e o frasco foi imediatamente selado com uma tampa de rosca equipada com um septo de borracha revestido com PTFE. O frasco foi colocado numa placa agitadora magnética, e durante a agitação vigorosa (700 rpm), foi efectuada a extracção de SPME com headspace. A fibra foi revestida com uma película de 100-μm de poli(dimetilsiloxano) (PDMS). Após a extração, a fibra foi introduzida na porta de entrada aquecida do GC para a dessorção térmica e determinação da pirólise-AFS.
O conteúdo total de Hg das amostras foi determinado com o mercúrio direto usando 100 mg de amostra sólida e calibração externa.49
Outra técnica para a determinação do metilmercúrio em tecido de peixe que consiste no sistema GC-ICP-MS com uma técnica SPME (PDMS) para a extração do analito foi proposta.41
Preparação da amostra: 0,25 g de amostra com uma quantidade apropriada de MM198 Hg spike enriquecido e 20 ml de solução metanólica KOH 25% (m/v) foram agitados durante 5 h e depois armazenados a 4 °C até à análise. Foram preparadas seis amostras de calibração de diluição isotópica inversa para quantificar a concentração do espigão de MM198 Hg enriquecido. Um volume de 0,200 ml de solução de MM198 Hg spike enriquecida e 0,240 ml de 2,042 μg ml-1 (ou 1,993 mg ml-1) de abundância natural de solução mmHg foram pipetados com precisão para um frasco e diluídos com metanol para 10 ml. Para o preparo da amostra de headspace SPME, apenas um volume de 100 ml de amostra de calibração de diluição isotópica de 100 ml (devido à alta sensibilidade do SPME GC-ICP-MS) foi transferido para um frasco de vidro de 50 ml para quantização.
Apenas 20 ml de solução tampão 1 mol l-1 NaAc e 1 ml de NaBPr4 a 1% foram adicionados, o frasco foi tampado com um septo de borracha de silicone revestido com PTFE. A agulha SPME foi inserida através do septo, e o preparo da amostra de headspace foi realizado durante 10 min. Durante a extração, a solução foi vigorosamente agitada com uma barra de agitação magnética revestida com teflon. O analito coletado foi então dessorado da fibra SPME para a coluna GC.41