O resíduo de sítio ativo, His(15), em proteína contendo histidina, HPr, pode ser substituído por aspartato e ainda atuar como um fósforo e fosfodonor com enzima I e enzima IIA(glicose), respectivamente. Outras substituições, incluindo cisteína, glutamato, serina, treonina e tirosina, não apresentaram qualquer atividade. A enzima I K(m) para His(15) –> Asp HPr é aumentada 10 vezes e V(max) é diminuída 1000 vezes em comparação com HPr tipo selvagem. A fosforilação de Asp(15) levou a um rearranjo interno espontâneo envolvendo a perda do grupo fosforilo e uma molécula de água, o que foi confirmado pela espectrometria de massa. As espécies proteicas formadas tinham um pI superior ao His(15) –> Asp HPr, que poderia surgir da formação de uma succinimida ou de uma isoimida. A hidrólise da forma isolada de alta pI deu apenas ácido aspártico no resíduo 15, e nenhum ácido isoaspártico foi detectado. Isto indica que uma isoimida em vez de uma succinimida é formada. Na ausência de fosforilação, nenhuma formação da forma pI alta pôde ser encontrada, indicando que a fosforilação catalisou a formação da ciclização. O possível envolvimento de Asn(12) em uma ciclização interna com Asp(15) foi eliminado pelo Asn(12) –> Ala mutação em His(15) –> AspHPr. Asn(12) substituições de alanina, aspartato, serina e treonina em HPr tipo selvagem indicaram uma exigência geral de resíduos capazes de formar uma ligação de hidrogênio com o átomo de Nepsilon(2) de His(15), mas a eliminação da ligação de hidrogênio tem uma diminuição de apenas 4 vezes em k(cat)/K(m).
Afiliação Organizacional: 
Departamento de Bioquímica, Universidade de Saskatchewan, Saskatoon, Saskatchewan S7N 5E5, Canadá.
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