Tetramisole (Sigma T1512、10 mg/mL stock solution in H2O diluted to approximately 100 μg/mL in egg salts) addition is optional; this drug is paralyses and makes cutting easier.この薬は虫を麻痺させ、切断を容易にする。 この薬剤は虫を麻痺させ、切断しやすくする。 メスの刃はすぐに腐食してしまうので、毎日新しいものを使う。 テトラミソールが過剰になると、NaOCl溶液に沈殿物が形成される。
最大の収量を得るには、切断したワームを、等量のNaOCl溶液を切断滴に直接加えて約1分間処理するとより多くの卵が放出される。 卵が放出されたらすぐに、使用したNaOClと同量のEGMを加えて、さらなる卵の損傷を防ぐ。 この処理は前核段階を殺し、1細胞胚を損傷する。 キチンナーゼで処理する前にも、3分間のNaOCl処理が必要であり、均一な消化が可能である。 2細胞期以前の卵の場合、殻はまだ多少透過性があるので、虫を切り出したらすぐに等量のEGMを加える。 この後、多くは3分間のNaOClとキチナーゼ処理に耐え、キチナーゼ処理と硝子体包の除去の後でも、早く作業をすれば1細胞期のものもある。
満足できるトランスファーピペットは、SMI micropipettor 5-から30μLキャピラリー（Fisher 21-380-9C) またはWorld Precision Instruments 4インチキャピラリー (1B100F-4) から、非常に小さな炎でダブルプルピングして作ることができる。 この方法は、まず加熱して軽く引っ張り、中央部を薄くし、次に短く冷却し、さらに軽く再加熱しながらキャピラリーに張力をかけ、最後に引っ張るものです。 理想的な引き方は、シャンクのはっきりした、徐々に細くなる3/4～1インチ程度のピペットを作ることです。 コルクに大きな注射針を取り付け、チューブにスクリュークランプを付けてガスの流量を調整すれば、小さなガスバーナーを作ることができます。 また、自動引き抜き機で引き抜くことで、一定の大きさのピペットを作ることもできます。 使用する前に、親指の爪と指先でつまむか、解剖顕微鏡下で剃刀を使い、100～150μm（卵の直径の3～4倍）程度の希望の先端までキャピラリーを折ってください。 マイクロフォージ顕微鏡を使用すると、安定したピペットを作ることができますが、必須ではありません。 ピペットの直径を小さくして、液体が移らないようにします。 ピペットの内側に卵が付着しても、NaOCl溶液やEGMで洗い流しながら使用すれば、多くは回収できます。
キチナーゼ消化が8分以内にうまくいかないと、おそらく全くうまくいかないでしょう。 最も一般的な問題は、次亜塩素酸塩と虫の生理的状態です（初日の産卵では、卵が硬くなるようです）。 次亜塩素酸塩は賞味期限が切れていないものを使用し、通常賞味期限の1ヶ月ほど前から貧弱になってきます。 ストックは通気性の良い暗めの瓶に、上端近くまで入れて冷蔵保存してください。
酵素処理後、特に透過処理後の胚はかなり粘着性があり、固まりやすいので、一度に1個か数個だけピペッティングすることによって、これを最小限に抑えることができます。
透過処理ピペットは、Kwik-filインジェクションキャピラリー（World Precision Instrumentsの1B100F-4）を用いて、トランスファーピペットと同じように手で引っ張ります。 内糸はビテリンエンベロープを切断するのに有効である。 理想的な引き方は、薄切片に長い緩やかなテーパーをつけ、希望する直径に切断できるようにすることである。 ピペットは、解剖スコープ下のパラフィルム上で新鮮なメス刃で切断する。 マウスピペット用のアダプターは、マウスチューブに取り付けた注射針に細径のタイゴンチューブを通すことで作製することができます。 ピペットの先端にEGMを口径の大きい方まで満たし、キチン化した胚の最初のバッチでテストします；小さすぎる場合はピペットの先端を切り直します。 理想的なサイズは、取得しようとする胚の年齢によって異なります；非常に初期の段階はより壊れやすく、わずかに大きな内径が必要です；8細胞より大きい胚は、より少ないダメージで圧縮され、しばしばガラス膜をそのままにして大きいピペットから出てくるでしょう。 このような非透過胚は孵化期まで発達し続ける。
透過ピペットの充填と洗浄には、マウスピペットにシリンジを使用する。実際の透過は、口の空気圧で行われる。 ピペットは口径が小さいので、数時間空気中に置いても乾燥しませんが、乾燥するとやがて目詰まりを起こします。 ピペットの先端を蒸留水で数回洗い、滅菌蒸留水または0.1M塩酸の入ったチューブにピペットの先端を吊り下げ、完全に沈まないようにテープで「旗」をつけて保存します。
ピペットが正しければ、胚のバッチを個別にピペットに吸い込み、静かに排出すれば、ほんの数分で透過させることが可能です。 ピペットの内径により、圧縮されて出たり出なかったりしますが、数分で丸くなります。 透析で溶解が多い場合は、消化が不完全か、ピペットの内径が小さすぎたかのどちらかです。 細胞質分裂開始後4〜5分間は細胞膜がかなり不安定なため、分裂中や分裂直後の胚が溶解したり、胚珠が融合して、後に異常な四極分裂を起こすことがある。
非常に細いまつげ（伝統的な電子顕微鏡の道具）を接着剤でつまようじに取り付けたものが、迅速な手動の胚腫の分離に最も満足のいく道具である。 まつ毛はアルコールとティッシュできれいにすることができる。 分裂直後に分離すると、ブラストメアは溶けてしまう。切断後5-10分が、より早い分離が必要な場合を除き、うまく操作できる最適な時間である。 AB/P1分離が最も簡単です。 4細胞胚の分離も可能です。 また、P2やEMSの胚葉を得るために、1回目の分割でP1、2回目の分割でEMS/P2を分離することもできます。 P系統の胚盤は、相対的な大きさとその直線的な配置によって認識することができる。 収量は少ないが，最初に分離したP1胚盤の4つの子孫からMS，E，P3，Cを分離することができる。 細胞の大きさによる同定は、細胞周期を調べることによって確認することができる。