Abstract

5-5′’-Dithio-bis(2-nitrobenzoic acid) (DTNB またはエルマン試薬;文献1) はシステインのフリースルフヒドリル側鎖と反応してタンパク質とthionitrobenzoic acid (TNB) 残基間に S-S 結合形成させる。 この修飾は一般に迅速かつ選択的である。 代替試薬(N-エチルマレイミドやヨードアセトアミドなど)に対するDTNBの主な利点は、この試薬の選択性と、反応の経過を分光光度計で追跡できることである。 反応は通常pH7.0〜8.0で行われ、酸化的条件下でも安定に修飾される。 TNB基は、S-S結合の還元に日常的に用いられる試薬、例えばメルカプトエタノールで処理したり、シアン化カリウム(2)(注1)によって修飾タンパク質から遊離することが可能である。 また、同じタンパク質、あるいは活性部位に存在する異なるシステイン側鎖の反応性がしばしば非常に顕著に異なること、および様々なチオール修飾試薬が利用できることを利用して、他の、より反応性の高いシステイン残基が存在するタンパク質中のシステイン側鎖を選択的に修飾できる(3)

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