融合タグ（タンパク質への付着部位として遺伝的にコードされて発現するアミノ酸配列）により、ネイティブ酵素の活性向上が期待されています。 酵素の特異的な精製を可能にし、酵素の物質的な支持体への固定化を簡便かつ効率的に行うことができます。 本研究では，Strep-tag II 融合タグが Candida antarctica 由来のリパーゼ B (CALB) の性質に及ぼす影響を明らかにした。 CALB の成熟部分をコードする遺伝子をコドン最適化し、大腸菌で発現させるために pASG-IBA2 プラスミドにクローン化した。 精製したリコンビナントStrep-tag II CALBをStrep-Tactinベースの支持体にアフィニティー結合により固定化し、固定化およびフリーのStrep-tag II CALBを市販のCALBと比較検討した。 この酵素は、非特異的な結合を示すことなく、培養液から選択的に精製することができた。 精製した融合タグ付き酵素の触媒効率は、遊離型の市販CALBの触媒効率よりも有意に高かった。 Strep-Tactinで修飾した架橋アガロース担体に融合タグ酵素を固定化すると、触媒活性のある酵素が得られたが、固定化酵素のkcatは遊離タグの酵素に比べて著しく減少した。 この結果は、C末端のStrep-tag II融合タグは、遊離型CALBの触媒効率を向上させるために用いることができるが、Strep-Tactin修飾支持体に酵素を結合させる固定化アプリケーションには適さない可能性があることを示している
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