Abstract
La connettività funzionale cerebrale (FC) è definita come la coerenza nell’attività tra aree cerebrali sotto un compito o nello stato di riposo (RS). Applicando la risonanza magnetica funzionale (fMRI), la FC RS mostra diversi modelli che definiscono le reti cerebrali RS (RSNs) coinvolte in funzioni specifiche, perché la funzione cerebrale è nota per dipendere non solo dall’attività all’interno delle singole regioni, ma anche dall’interazione funzionale di diverse aree in tutto il cervello. L’analisi delle regioni d’interesse e l’analisi a componenti indipendenti sono i due metodi più comunemente applicati per l’indagine delle RS. La sclerosi multipla (SM) è caratterizzata da lesioni multiple che colpiscono principalmente la materia bianca, determinando una disconnessione sia strutturale che funzionale tra varie aree del sistema nervoso centrale. Lo studio della FC RS nella SM è principalmente volto a comprendere le alterazioni dell’architettura funzionale intrinseca del cervello e il loro ruolo nella progressione della malattia e nella compromissione clinica. In questo articolo, esamineremo i risultati ottenuti dall’applicazione della fMRI RS in diversi fenotipi di sclerosi multipla (SM) e le correlazioni dei cambiamenti della FC con le caratteristiche cliniche in questa patologia. La conoscenza dei cambiamenti della FC della RS può rappresentare un sostanziale passo avanti nel campo della ricerca sulla SM, sia per scopi clinici che terapeutici.
1. Introduzione
La sclerosi multipla (SM) è una malattia infiammatoria e degenerativa del sistema nervoso centrale (SNC). È caratterizzata da lesioni multiple che colpiscono principalmente la materia bianca, con conseguente disconnessione strutturale e funzionale tra varie aree del SNC, con conseguente ampia gamma di segni e sintomi.
La risonanza magnetica funzionale (fMRI) durante l’esecuzione di vari compiti ha fornito una grande quantità di dati che mostrano alterazioni funzionali nei pazienti con SM, generalmente interpretati come cambiamenti plastici adattivi volti a limitare l’impatto clinico della malattia. Più recentemente, gli studi fMRI durante lo stato di riposo (RS) hanno permesso di esplorare la connettività funzionale (FC) del cervello. Questo aspetto è di particolare interesse nella SM, che è considerata tra le sindromi da disconnessione. Lo studio della RS FC nella SM è principalmente volto a comprendere le alterazioni dell’architettura funzionale intrinseca del cervello e il loro ruolo nella progressione della malattia e nella compromissione clinica. La fMRI RS può essere utilizzata per identificare regioni cerebrali anatomicamente separate, anche se funzionalmente connesse, che configurano specifiche reti RS. A differenza della fMRI durante l’esecuzione di un compito, la fMRI RS non è influenzata dalla prestazione del compito, che può differire da quella dei soggetti sani, soprattutto nei pazienti con disabilità clinica.
In questa breve rassegna ci accingiamo a spiegare gli aspetti fisiologici alla base del cervello RS FC e a descrivere gli approcci metodologici per analizzarlo. Ci concentreremo poi sulle applicazioni della RS fMRI in vari fenotipi di SM, considerando anche le correlazioni tra la compromissione clinica e le alterazioni della FC sia within- che between-network nella SM. I cambiamenti funzionali non rappresentano necessariamente una neuroplasticità adattativa volta a mantenere una funzione normale nonostante il diffuso coinvolgimento patologico del SNC; in alcuni casi potrebbero rappresentare un tentativo inefficiente o addirittura peggiorativo di compensare il danno tissutale, cioè una plasticità disadattiva. Le correlazioni tra i cambiamenti nella FC e il livello di compromissione clinica potrebbero aiutare a distinguere tra cambiamenti neuroplastici benefici e non benefici.
Infine, esponiamo brevemente alcune delle direzioni più promettenti per ulteriori indagini sulla RS FC nella SM.
2. Resting-State fMRI: Basi fisiologiche
L’attività cerebrale è stata solitamente considerata come una risposta a stimoli esterni e interni, sebbene sia stata dimostrata un’attività organizzata anche a riposo. La risonanza magnetica funzionale allo stato di riposo (RS fMRI) è usata per analizzare la coerenza funzionale nell’attività di diverse aree cerebrali, cioè la connettività funzionale, a riposo (RS FC). Questa tecnica rileva fluttuazioni spontanee a bassa frequenza (approssimativamente nel dominio di 0.01-0.1 Hz) del segnale dipendente dal livello di ossigeno nel sangue (BOLD) che sono temporalmente coerenti attraverso reti anatomicamente separate (RSNs) e che rappresentano attività cerebrale ben organizzata. Il segnale BOLD, su cui si basa la fMRI, è dovuto ai cambiamenti nella concentrazione di emoglobina deossigenata, un agente di contrasto paramagnetico endogeno, che si traduce in una diminuzione del campo magnetico locale che può essere rilevato su T2-pesata Echo-Planar imaging. Quando un’area del cervello è attivata, il flusso e la velocità del sangue cerebrale aumentano in misura maggiore rispetto all’estrazione di O2, aumentando così il livello di ossigenazione del sangue, che a sua volta aumenta il segnale MRI. Il segnale BOLD riflette specifici eventi biologici e funzionali e si ritiene che sia dovuto all’aumento dell’attività neurale causato da una combinazione di meccanismi biologici, compresi gli effetti dei neurotrasmettitori, degli ioni e di altri metaboliti. Tuttavia, se le fluttuazioni del segnale BOLD rappresentano cambiamenti nella fisiologia del cervello che sono indipendenti dalla funzione neuronale o riflettono l’attività neuronale di base non è ancora chiaro. Alcuni studi suggeriscono che le fluttuazioni RS sono una proprietà intrinseca del cervello poiché persistono attraverso condizioni come il sonno, l’anestesia e l’esecuzione di un compito. D’altra parte, l’origine neuronale dell’attività BOLD è supportata da studi basati su una combinazione di fMRI e tomografia a emissione di positroni (PET), che hanno evidenziato il coinvolgimento della sola materia grigia (GM) in voxel significativi , da studi basati su una combinazione di fMRI ed elettroencefalogrammi, che hanno rivelato una correlazione tra segnale BOLD e attività elettrica corticale , e da studi che hanno evidenziato cambiamenti RSNs indotti da malattie neurologiche .
3. Resting-State fMRI: Approcci metodologici
Per fornire la migliore impostazione possibile per gli studi RS, i soggetti vengono solitamente istruiti a rimanere svegli, calmi e fermi nello scanner, a fissare un punto specifico o a chiudere gli occhi, e a cercare di non pensare a nulla. L’uso di un campo magnetico elevato è di solito migliore, in quanto consentirebbe di rilevare più facilmente i cambiamenti di segnale, che sono proporzionali al campo magnetico principale, e di separare le frequenze di rumore da RSNs corretto più efficacemente a causa di un breve tempo di rilassamento . Lo scopo dell’applicazione fMRI è quello di rilevare diverse RSNs e di indagare il loro coinvolgimento in funzioni specifiche. I due metodi più comunemente applicati per l’indagine RS sono l’analisi della regione di interesse (ROI) e l’indagine dell’intero cervello, quest’ultima consiste principalmente nell’analisi delle componenti indipendenti (ICA). L’analisi ROI correla il corso del tempo di un ROI predefinito con altri voxel del cervello, in base al rilevamento di fluttuazioni BOLD coerenti. Tuttavia, questo approccio è limitato dalla relativa arbitrarietà della selezione della ROI. Al contrario, l’ICA è un approccio guidato dai dati, per tutto il cervello, progettato per separare un segnale multivariante nelle sue sottocomponenti, fornendo così un singolo segnale da un complesso di segnali. L’ICA viene utilizzato senza alcuna ipotesi a priori e assumendo l’indipendenza statistica delle fonti e il segnale BOLD viene decomposto in mappe spazialmente e temporalmente distinte con i loro propri corsi temporali. Ogni mappa può essere interpretata come una rete di regioni cerebrali che condividono fluttuazioni BOLD simili nel tempo. Un problema che deve essere considerato quando si individuano le RSN, utilizzando l’analisi regionale o dell’intero cervello, è la presenza di possibili artefatti legati al movimento e al rumore fisiologico, cioè i cicli cardiaci e respiratori. Tuttavia, è stata dimostrata una differenza di frequenza tra RSNs e rumore, con il primo caratterizzato da fluttuazioni di 0,01-0,1 Hz e il secondo da fluttuazioni di 0,3-1 Hz . Data l’importanza di rimuovere i segnali confondenti per migliorare la qualità dei dati, i segnali di rumore sono ora comunemente monitorati per mezzo di un software specifico che corregge retrospettivamente i dati fMRI. Allo stesso modo, altre fonti di rumore specifiche della regione, come i segnali della materia bianca (WM) e del liquido cerebrospinale (CSF), dovrebbero essere considerati e rimossi durante l’analisi, in quanto il segnale BOLD in queste regioni è più suscettibile di artefatti che nella GM corticale. Nonostante tutte le questioni tecniche che sono coinvolte nella raccolta dei dati RS BOLD, nessun consenso è stato ancora raggiunto sulla necessità di una precisa impostazione sperimentale. Tuttavia, l’individuazione di molti sistemi neuroanatomici la cui attività spontanea è coerente ha portato all’identificazione di specifici RSN funzionali. I più noti di questi sistemi sono la modalità predefinita, sensoriale-motoria, attenzione dorsale, visiva, funzione esecutiva, uditiva, frontoparietale lateralizzato, salienza, cerebellare, e reti dei gangli della base (vedi Figura 1). Recentemente, i cambiamenti nella metrica FC nel tempo sono stati anche dimostrati, dando così origine alla caratterizzazione della FC dinamica. Letteratura emergente, utilizzando nuove tecniche di analisi, vale a dire, l’analisi sliding-window, tempo-frequenza analisi di coerenza, e flessibile dei minimi quadrati basato su tempo variabile strategia di regressione dei parametri, suggerisce che le metriche FC dinamico può fornire l’esistenza di cambiamenti nei modelli macroscopici attività neurale probabilmente legati alle condizioni comportamentali. Tuttavia, le limitazioni relative all’analisi e all’interpretazione rimangono e non è ancora chiaro se la FC dinamica consiste nella ricorrenza di più modelli discreti o è una semplice variazione del modello lungo il tempo.
È ampiamente noto che la funzione cerebrale dipende non solo dall’attività delle singole regioni, ma anche dall’interazione funzionale di diverse aree nell’intero cervello attraverso i cosiddetti connettomi. I connettomi sono proiezioni assonali che permettono la comunicazione funzionale tra regioni del cervello anatomicamente separate. Recenti tecniche di elaborazione consentono l’indagine delle connessioni funzionali su larga scala, permettendo così la creazione di un grafico a matrice della connettività cerebrale. La connettività di rete su larga scala è solitamente rappresentata come un grafico composto da regioni cerebrali (nodi) che sono interconnesse (bordi). Molto brevemente, dopo una definizione iniziale dei nodi, viene calcolata una matrice di connessioni funzionali tra i nodi, anche se solo le connessioni superiori alla soglia di impostazione sono classificate come bordi. La connettività funzionale è fornita come un coefficiente di correlazione statistica della coerenza del segnale BOLD tra reti diverse. La struttura di una rete può essere progettata in base alle caratteristiche di alcuni valori del grafico, come il coefficiente di raggruppamento, la lunghezza del percorso, la centralità, il grado e la modularità di un nodo, evidenziando così un modello di organizzazione specifico. È stato dimostrato che la connettività della rete cerebrale globale presenta un’organizzazione small-world tutt’altro che casuale, caratterizzata da un alto livello di connessioni locali tra i nodi e una lunghezza del percorso molto breve che configura il cosiddetto “hub” e una bassa presenza di connessioni lunghe tra gli hub; questa organizzazione della rete eleva l’efficienza e riduce sostanzialmente la ridondanza. E’ stata dimostrata anche l’organizzazione cosiddetta “rich-club”, che consiste nella presenza di hub di alto ordine più densamente connessi. Il fenomeno del rich-club fornisce importanti informazioni sulla struttura di ordine superiore di una rete, in particolare sulla gerarchia e la specializzazione.
Le patologie neurologiche possono cambiare le interazioni dei nodi, interrompendo così l’integrazione dei sistemi e compromettendo il loro funzionamento.
4. Resting-State fMRI: Applicazione nella sclerosi multipla
I progressi nella comprensione della FC e del ruolo delle sue alterazioni nella fisiopatologia del cervello umano sono dati dallo studio di malattie come la SM. Infatti, la SM è caratterizzata da un danno particolarmente diffuso e grave che colpisce principalmente la materia bianca e che può causare alterazioni della FC secondarie alla disconnessione strutturale tra i nodi RSN.
Le anomalie degli RSN sono state trovate in quasi tutti i fenotipi della sclerosi multipla (SM).
FC è maggiore in aree cerebrali specifiche di molti RSNs in pazienti con sindrome clinicamente isolata (CIS) rispetto ai soggetti sani (HS) o pazienti con SM recidivante-remittente (RR-MS), anche se il volume GM e integrità WM sono conservati . Questi risultati suggeriscono che la coerenza dell’attività cerebrale aumenta nella prima fase della malattia, probabilmente come un fenomeno compensatorio, e viene successivamente perso nella fase avanzata della malattia come risultato della progressione del danno strutturale. Tuttavia, non è stato ancora raggiunto un accordo sull’effettivo significato dei cambiamenti della fMRI nella SM precoce: anche se l’ipotesi compensatoria è ancora prevalente, un singolo studio ha riportato valori globali più bassi di coerenza temporale nei pazienti CIS.
I risultati della fMRI RS sono stati solo parzialmente concordanti quando sono stati studiati soggetti con SM RR, probabilmente a causa dell’ampio spettro di caratteristiche cliniche che sono proprie di questo fenotipo, nonché dei diversi approcci metodologici. Anomalie diffuse della FC sono state trovate nei soggetti con SMRR: alcuni studi hanno evidenziato un aumento significativo dei livelli di connettività globale, mentre altri hanno riportato una diminuzione della FC. La riduzione della FC è in linea con i risultati degli studi di perfusione PET e MRI, che hanno mostrato un diffuso ipometabolismo cerebrale e ipoperfusione in questa condizione, probabilmente a causa del progressivo accumulo di danno strutturale. L’aumento della FC invece è un evento più complesso; sebbene sia generalmente considerato come un tentativo adattativo di compensare il danno tissutale, non può essere completamente esclusa l’ipotesi alternativa che l’aumento della FC possa rappresentare una plasticità disadattiva o un epifenomeno del processo patologico. Infine, alcuni studi hanno trovato che le reti specifiche, cioè la RSN talamica e DMN, possono mostrare sia connessioni significativamente più deboli con alcune regioni del cervello e connessioni più forti con altri, suggerendo così che c’è una ridistribuzione della connettività, oltre a una tendenza generale di globalmente aumentato o diminuito FC in MS.
Solo pochi studi concentrati su fenotipi progressivi MS. In un recente lavoro che ha esplorato l’alterazione FC in RR e secondaria progressiva (SP) MS, gli autori hanno trovato un aumento FC in entrambi i gruppi di pazienti; tuttavia, i cambiamenti specifici in entrambe le direzioni sono stati osservati anche tra i gruppi RR e SP MS. È interessante notare che questi cambiamenti FC sembrano essere paralleli allo stato clinico dei pazienti e alla capacità di compensare la gravità delle disabilità clinico/cognitive, sostenendo il ruolo compensatorio della riorganizzazione funzionale.
In uno studio che includeva pazienti con SM primariamente progressiva (PP) e SP, rispetto a HS, FC è stato trovato per essere diminuito in alcune aree del DMN in entrambi i gruppi di pazienti; FC nelle componenti anteriori del DMN era correlato con il deterioramento cognitivo. Quando i pazienti con SP e PP MS sono stati confrontati, un più alto FC nella corteccia cingolata anteriore è stato trovato in SP.
Insieme questi risultati mostrano che non c’è una relazione diretta tra i cambiamenti RSNs e fenotipo clinico, suggerendo un ruolo decisivo di specifiche caratteristiche cliniche e genetiche dei singoli soggetti nel determinare la risposta funzionale alla malattia.
5. fMRI cambiamenti di connettività funzionale e la loro correlazione con disabilità clinica
5.1. Within-Network Connectivity
Le correlazioni dei cambiamenti FC within-network con i parametri clinici della SM sono stati ampiamente riportati nella SM . Anche se la capacità della RS fMRI di rilevare la riorganizzazione funzionale del cervello nella SM è stato dimostrato, il ruolo delle alterazioni FC nella patogenesi della SM, così come la potenziale relazione tra la riorganizzazione della rete a riposo e la disabilità clinica, rimane non completamente compreso.
Una correlazione negativa tra la forza FC e la compromissione clinica è stata ripetutamente riportata; pochi studi hanno riportato una correlazione positiva tra la forza FC e la compromissione clinica. I risultati discordanti tra gli studi possono essere dovuti non solo alle differenze nelle popolazioni di pazienti e nell’analisi dei dati, ma anche alla funzione clinica considerata e alle specifiche RSN analizzate.
Per quanto riguarda le correlazioni tra la rete motoria e la disabilità clinica, un lavoro recente ha rivelato un’associazione tra una ridotta connettività intranetwork nella rete motoria e livelli più elevati di gravità della malattia nei pazienti con SM RR, indicando così la possibilità che i cambiamenti dello stato di riposo possano servire come biomarcatore della progressione della malattia. D’altra parte, una maggiore connettività nell’area premotoria sinistra è stata trovata associata a una maggiore disabilità clinica nella SM RR, ma non nella SM SP. Questo risultato suggerisce che anche se la progressione della malattia è legata alla FC interrotta all’interno della rete motoria, l’aumento della FC in specifiche aree motorie può rappresentare un tentativo di compensare la compromissione funzionale, almeno nella SM RR.
Per quanto riguarda le correlazioni tra alterazioni FC e prestazioni cognitive, che risulta dall’interazione di diverse funzioni cerebrali complesse coinvolte nella cognizione, cioè, memoria di lavoro, attenzione e funzione esecutiva, l’interpretazione dei risultati è più complessa. L’aumento, la diminuzione e sia l’aumento che la diminuzione della FC all’interno delle reti di attenzione sostenuta sono stati trovati associati alle prestazioni cognitive nella SM. La diminuzione della FC nelle componenti anteriori della DMN è stata trovata correlata all’accumulo di deficit cognitivi nei pazienti con SM progressiva. Bonavita et al. hanno confermato la disfunzione anteriore della DMN anche nella SM RR; inoltre, hanno trovato che i pazienti con SM RR hanno anche mostrato un aumento della FC nelle componenti posteriori della DMN, che era più pronunciato nei pazienti cognitivamente conservati. Un recente studio su un gruppo eterogeneo di SM ha dimostrato che la diminuzione delle prestazioni cognitive è accompagnata da una ridotta FC in tutte le principali RSN ed è anche direttamente correlata al danno cerebrale. D’altra parte, un altro studio sulla SM RR, focalizzato sulla RSN talamica, ha riportato una diminuzione delle prestazioni associata ad un aumento della FC, suggerendo che i cambiamenti neuroplastici non sono in grado di compensare completamente la disfunzione cognitiva.
Presi insieme, questi risultati dimostrano che la riorganizzazione RSN è strettamente associata alla disabilità cognitiva nella SM. Sulla base di questa forte associazione, i cambiamenti FC sono stati proposti come promettenti marcatori surrogati del carico di malattia, nonché strumenti utili per monitorare le strategie riabilitative nella SM. Infatti, la riabilitazione cognitiva ha dimostrato di correlare con i cambiamenti nella RS FC delle regioni cerebrali che servono le funzioni allenate. Connettività di rete su larga scala
Studi di connettività di rete su larga scala sono stati applicati nella SM con il tentativo di dare una visione globale dei modelli distribuiti di anomalie FC anche in relazione al danno strutturale e alla disabilità.
Anomalie nella FC di reti su larga scala sono state dimostrate in pazienti con SM, con la disconnessione che sembra essere proporzionale all’estensione delle lesioni e correlata alla gravità della disabilità . Il coinvolgimento della disconnessione RSN nella SM è diffuso e comprende anomalie della funzione di rete motoria, sensibile, visiva e cognitiva. La FC è solitamente diminuita in tutto il cervello. Ad esempio, la diminuzione della FC nelle regioni subcorticali e corticali e nelle connessioni controlaterali ha dimostrato di essere correlata al carico di lesioni e di essere in grado di discriminare i pazienti con SM dai controlli con una sensibilità del 82% e una specificità del 86% . Inoltre, la FC nelle reti attenzionali è più forte nei pazienti cognitivamente conservati che nei pazienti cognitivamente compromessi ed è correlata ad un minore danno strutturale. Una ridotta integrazione funzionale tra aree separate è stata trovata anche nelle prime fasi della SM. Questi risultati suggeriscono che la disconnessione funzionale è parallela sia al danno strutturale che alla compromissione clinica.
Al contrario, un più alto grado di connettività tra le RSN associate alle funzioni visive è correlato a un maggiore carico di malattia nonostante la ridotta connettività all’interno della rete in altre aree. Questo risultato può essere interpretato come un evento focalizzato in un quadro di riorganizzazione globale del cervello FC nel corso della malattia. Questa ipotesi è supportata dalla scoperta di una ridistribuzione diffusa modularità nella SM, con alcuni RSNs visualizzazione diminuita connettività, dovuta in parte anche al carico della lesione e compromissione clinica, e altri visualizzando una maggiore connettività.
L’analisi della connettività su larga scala, quando applicato in pazienti rispetto ai controlli, può evidenziare le differenze nell’organizzazione funzionale intera rete cerebrale tra i due gruppi. Di conseguenza, FC su larga scala è stato proposto come uno strumento promettente per discriminare i soggetti MS da HS, per capire il substrato funzionale della disabilità clinica, e per monitorare gli effetti delle terapie. Tuttavia, sono necessari ulteriori studi per chiarire il significato corretto di questi cambiamenti e se le modifiche funzionali limitano l’impatto clinico della malattia o, al contrario, sono un biomarcatore di gravità della malattia.
6. Discussione e direzioni future
la tecnica della risonanza magnetica permette di rilevare la connettività funzionale del cervello in tutto il cervello. La sua applicazione nelle patologie neurologiche, cioè la SM, può fornire informazioni preziose sui cambiamenti neuronali che si verificano dopo il danno, aiutando così a capire la fisiopatologia della malattia e i possibili approcci terapeutici. Anomalie di connettività diffuse sono evidenti sia all’interno che tra le RSN nei pazienti con SM, ma, purtroppo, i risultati non sono sempre concordanti e il significato dei cambiamenti fMRI nella SM non è completamente chiaro. Inoltre, gli studi fMRI RS sono limitati dall’interferenza di artefatti di rumore, come gli eventi respiratori o cardiaci, che può essere parzialmente responsabile di queste incongruenze e può anche spiegare, almeno in parte, i risultati fMRI discordanti in fenotipi MS simili attraverso diversi studi. Un altro problema che può influenzare l’omogeneità dei risultati può essere attribuito alle differenze tra i pazienti, cioè in termini di durata della malattia, all’interno della stessa coorte, o tra coorti con fenotipo di malattia simile. Questo problema può anche influenzare le correlazioni tra i risultati FC e misure comportamentali, dal momento che non sempre mostrano le stesse direzioni. Di conseguenza, il significato delle alterazioni fMRI nella patologia neurologica, in termini di meccanismi compensativi o disadattivi, deve ancora essere chiarito. Nonostante alcuni risultati discrepanti, un aumento della FC nelle RSN è stato ripetutamente riportato e interpretato come una riorganizzazione adattativa del cervello; questa ipotesi è supportata dal fatto che l’aumento della connettività RS nei pazienti con SM di solito si verifica in aree cerebrali con ampie connessioni corticali. Tuttavia, questo fenomeno adattativo può essere un processo finito che è presente nelle prime fasi della malattia, ma viene perso nelle fasi più avanzate, quando il danno strutturale e la compromissione clinica sono troppo gravi per essere compensati. Infatti, l’aumento dell’accoppiamento funzionale tra alcune aree della rete motoria che è parallelo all’aumento della disabilità sembra essere limitato allo stadio RR della malattia e si perde negli stadi più avanzati; allo stesso modo, la FC in alcune regioni della DMN è più alta nei pazienti RRMS cognitivamente conservati che in quelli cognitivamente affetti.
La caratterizzazione delle dinamiche RS, l’analisi teorica dei grafi per studiare le proprietà della rete cerebrale, e l’integrazione dei dati RS fMRI con altre tecniche, cioè la stimolazione magnetica transcranica e la PET, potrebbero fornire nel prossimo futuro nuove conoscenze sulla fisiopatologia della SM per scopi clinici e terapeutici.
Conflitto di interessi
Gli autori dichiarano che non c’è conflitto di interessi riguardo alla pubblicazione di questo articolo.