Abstract

Scopo. Valutazione comparativa delle caratteristiche morfologiche delle capsule anteriori e dell’induzione dell’apoptosi nelle cellule epiteliali dopo la chirurgia della cataratta assistita dal laser a femtosecondi (FLACS) e la chirurgia di facoemulsificazione standard. Metodi. Gruppo 1: 30 capsulotomie anteriori FLACS e Gruppo 2: 30 capsulotomie anteriori curvilinee continue manuali. Tutti i pazienti sono stati operati dallo stesso chirurgo esperto. Sono state valutate le caratteristiche morfologiche delle capsule anteriori e l’induzione dell’apoptosi nelle cellule epiteliali. Risultati. Tutti i pazienti hanno rivelato un significativo miglioramento medio dell’acuità visiva meglio corretta (BCVA) 3 mesi dopo l’intervento, e non si sono verificate complicazioni intraoperatorie o postoperatorie importanti. L’epitelio capsulare è apparso conservato in entrambi i gruppi. L’analisi al microscopio elettronico a scansione ha rivelato bordi irregolari a forma di dente di sega nelle capsule del gruppo 1, mentre le capsule del gruppo 2 hanno mostrato bordi regolari e lisci. Un’espressione statisticamente significativa più alta dell’effettore apoptotico a valle della caspasi scissa 3 è stata osservata nel gruppo 1. Conclusioni. L’aspetto a dente di sega era probabilmente dovuto alla sequenza progressiva degli impulsi laser sulla capsula. Le proprietà di bassa energia/alta frequenza dell’impulso laser, combinate con un modello di impulso sovrapposto, hanno determinato una morfologia altamente continua dei bordi della capsula. La maggiore induzione di apoptosi nel gruppo FLACS potrebbe essere dovuta alla generazione di plasma dipendente dalla fotodisruzione e alla formazione di bolle di cavitazione.

1. Introduzione

La chirurgia della cataratta è l’intervento chirurgico più eseguito in tutto il mondo, con un numero crescente di procedure chirurgiche fino a 24 milioni all’anno, secondo le stime dell’OMS.

Per diversi anni, la tecnica di facoemulsificazione è stata il metodo standard per l’estrazione della cataratta e i continui miglioramenti tecnici come le microincisioni corneali chiare, l’uso di lenti intraoculari pieghevoli e l’applicazione di una minore energia degli ultrasuoni per la frammentazione della lente hanno reso la chirurgia della cataratta efficiente e sicura. La chirurgia della cataratta con microincisione bimanuale (B-MICS) è una variante minimamente invasiva della tradizionale facoemulsificazione coassiale, che, consentendo microincisioni corneali chiare di 1,4 mm, utilizza una punta faco senza maniche con un chopper irrigante separato che garantisce una maggiore stabilità della camera anteriore e la possibilità di utilizzare sia la mano destra che la sinistra durante la procedura chirurgica.

L’ultimo aggiornamento nella chirurgia della cataratta è stata l’introduzione della tecnologia laser a femtosecondi. Partendo dai laser a femtosecondi introdotti per la prima volta per la chirurgia corneale con lo scopo di produrre lembi corneali per la chirurgia refrattiva, la maggior parte dei laser a femtosecondi di ultima generazione operano nella chirurgia della cataratta con una frequenza di ripetizione fino a 160 kHz combinata con una gamma di energia di massimo 10-15 μJ.

Basato sui principi della fotodisruzione, questi tipi di laser ci permettono di standardizzare in modo ottimale alcune delle parti più difficili della procedura, tra cui la capsulotomia, la frammentazione nucleare e le incisioni corneali, oltre a fornire risultati più accurati e riproducibili, se confrontati con approcci manuali.

Fino all’avvento della tecnologia laser a femtosecondi, la capsuloresi curvilinea continua manuale (mCCC) è stata il metodo standard per l’apertura della capsula anteriore nella chirurgia della cataratta o nella sostituzione della lente refrattiva. La chirurgia della cataratta assistita dal laser a femtosecondi (FLACS) ha ora rivoluzionato questo importante passo chirurgico, creando capsulotomie prevedibili e curvilinee che risultano in una migliore sovrapposizione capsula-lente intraoculare (IOL) e una migliore centratura e posizione della IOL rispetto alla tecnica manuale. In particolare, i risultati precedenti hanno dimostrato che le capsulotomie FLACS hanno una dimensione ripetibile e precisa, sono centrate e, di conseguenza, forniscono una migliore centratura della IOL e una ridotta probabilità di inclinazione della IOL.

Diversi studi hanno esaminato la morfologia dei bordi e la scorrevolezza delle capsulotomie FLACS, che sono create da una specifica lunghezza d’onda del laser, energia dell’impulso, durata dell’impulso, modello di impulso, frequenza di ripetizione e dimensione dello spot. Le analisi preliminari delle capsule hanno mostrato un aspetto da francobollo con una rugosità significativa, probabilmente causata da diversi fattori, tra cui l’energia laser utilizzata per creare le capsulotomie.

Inoltre, l’opacizzazione della capsula posteriore (PCO) è una delle complicanze a lungo termine più ricorrenti della chirurgia della cataratta. Molti studi sono stati condotti finora per definire quali fattori possono influenzare lo sviluppo della PCO, tra cui il design della IOL, la somministrazione di agenti terapeutici, la tecnica chirurgica stessa, e altre procedure chirurgiche per pulire la capsula posteriore.

Come riportato in letteratura, la capsula della lente è esposta a danni meccanici o fotodisruttivi, quando viene eseguita la capsuloresi o la capsulotomia, con conseguente morte delle cellule epiteliali. L’ipotesi è che il laser a femtosecondi potrebbe ragionevolmente indurre l’apoptosi in misura maggiore.

Lo scopo di questo studio è stato quello di valutare le caratteristiche morfologiche della capsula del cristallino anteriore umano, anche a livello ultrastrutturale, dopo la chirurgia della cataratta eseguita con tecnica manuale e FLACS, rispettivamente. Inoltre, abbiamo indagato se l’apoptosi fosse indotta nell’epitelio monostratificato sotto la capsula anteriore, in seguito ai due approcci chirurgici.

2. Materiali e Metodi

Lo studio sperimentale è stato approvato dal Comitato Etico per la Ricerca Umana dell’Università di Modena e Reggio Emilia (Modena, Italia) ed è stato condotto in conformità alla Dichiarazione di Helsinki presso l’Istituto di Oftalmologia, Università di Modena e Reggio Emilia. Sono stati inclusi nello studio i pazienti con cataratta LOCS III grado 2 o 3 e un’acuità visiva per lontano corretta di 5/10 o peggio. I pazienti sono stati esclusi in caso di trauma oculare, sindrome da pseudoesfoliazione o altre comorbidità oculari. Lo studio è stato eseguito dopo il consenso scritto dei pazienti sottoposti a estrazione manuale tradizionale della cataratta (B-MICS) o a chirurgia della cataratta assistita dal laser a femtosecondi utilizzando il laser a femtosecondi Ziemer LDV Z8. Tutte le procedure chirurgiche sono state eseguite dallo stesso chirurgo esperto (G.M.C.).

2.1. Tecniche chirurgiche

È stata ottenuta una midriasi costante con instillazione di fenilefrina al 10% e ciclopentolato all’1% ed è stata eseguita un’anestesia locoregionale con blocco peribulbare (1,5 mL di lidocaina 2% e 1,5 mL di bupivacaina 0,5%).

2.1.1. Tecnica assistita da FSL

Abbiamo applicato con cura un anello di aspirazione monouso all’occhio, centrato sul limbus. L’anello di aspirazione è stato riempito di soluzione salina bilanciata (BSS) per creare un’interfaccia liquida, e il braccio mobile del sistema laser è stato agganciato sull’apice corneale. Le strutture oculari sono state mostrate dal sistema integrato di tomografia a coerenza ottica (OCT) e i parametri di trattamento sono stati determinati in modo personalizzato utilizzando la procedura guidata delle impostazioni della piattaforma laser. Le impostazioni degli impulsi laser di energia e frequenza erano 900 mW, 1 MHz per la capsulotomia; 950-1000 mW, 2 MHz per la facoframmentazione; 1200-1300 mW, 2 MHz per le incisioni corneali. Il trattamento laser è iniziato con la frammentazione della lente con un taglio a torta di otto pezzi, seguito da una capsulotomia anteriore di 5,2 mm di diametro. Infine, il laser ha eseguito due microincisioni corneali di 1,4 mm rispettivamente a ore 10 e a ore 2. Alla fine, l’anello di aspirazione è stato rimosso dalla superficie dell’occhio per procedere con la procedura faco. Il chirurgo ha controllato la pervietà delle ICC usando una spatola liscia, prima con un’inclinazione perpendicolare all’inclinazione del limbus e poi con movimenti delicati lungo l’incisione, in modo da aprirla completamente da un lato all’altro. La camera anteriore è stata riempita con dispositivo viscoelastico oculare (OVD) per procedere alla rimozione della capsula anteriore, facendo attenzione ad eventuali ponti capsulari di tessuto per evitare la fuga capsulare.

L’idrodissezione e l’idrodelineazione sono state eseguite utilizzando una cannula calibro 26 con iniezione di BSS sotto il bordo della capsula anteriore, facendo attenzione ai movimenti delle bolle d’aria, al fine di evitare eventuali blocchi e rotture capsulari posteriori. La tecnica di facoemulsificazione bimanuale è stata utilizzata per aspirare il nucleo con una sonda senza maniche angolata di 30 gradi di calibro 20 e un chopper irrigante di calibro 19 (Oertli-Instruments AG). Infine, l’irrigazione/aspirazione bimanuale della corteccia residua è stata eseguita utilizzando due sonde calibro 21 con una sezione ovale (manipolo di irrigazione calibro 21 liscio, manipolo di aspirazione calibro 21 ruvido, Bausch & Lomb) seguita dalla lucidatura della capsula posteriore. Tutte le lenti intraoculari sono state inserite nel sacco capsulare senza complicazioni. La rimozione della capsula della lente anteriore dopo la capsuloresi anteriore manuale o la capsulotomia anteriore assistita da FSL è mostrata nella Figura 1.

(a)
(a)
(b)
(b)

(a)
(a)(b)
(b)

Figura 1
Rimozione della capsula del cristallino anteriore in B-MICS e tecniche chirurgiche FLACS. (a) Capsuloressi anteriore manuale con micro-forcipe; (b) aspetto della lente dopo FLACS e rimozione della capsulotomia anteriore con micro-forcipe.

2.1.2. Tecnica standard

Il chirurgo ha eseguito due incisioni trapezoidali biplanari di 1,4 mm a ore 10 e a ore 2, rispettivamente, con un coltello precalibrato e una capsuloresi curvilinea continua manuale di 5 mm (mCCC). L’idrodissezione è stata eseguita con una cannula calibro 26 e la facoemulsificazione con una sonda senza maniche calibro 20, angolata di 30 gradi e un chopper irrigante (Bragamele calibro 19). La facoemulsificazione è stata ottenuta con la tecnica stop-and-chop. L’irrigazione/aspirazione è stata eseguita con due sonde calibro 21 a sezione ovale (manipolo per irrigazione calibro 21 liscio Stellaris, manipolo per aspirazione calibro 21 ruvido, Bausch & Lomb). In entrambe le tecniche, la IOL è stata impiantata senza allargare l’incisione principale; le incisioni sono state idrosuturate. Le IOL BunnyLens AF (Hanita Lenses, Israele) sono state impiantate attraverso una microincisione di 1,4 mm con la tecnica wound assisted attraverso l’iniettore ViscoJect™ BIO 1.5. Alla fine dell’intervento, l’OVD è stato rimosso e le incisioni sono state idratate per motivi di sicurezza.

La terapia postoperatoria consisteva in tobramicina e desametasone collirio quattro volte al giorno per 15 giorni, seguito da flurbiprofene collirio tre volte al giorno per altri 15 giorni.

2.2. Valutazione morfologica: Analisi di contrasto di fase, istologica e microscopia elettronica a scansione

I campioni della capsula del cristallino anteriore ottenuti con tecniche standard o assistite da FSL sono stati immediatamente lavati con tampone fosfato salino (PBS) dopo l’estrazione chirurgica. Al fine di valutare la morfologia e i bordi delle capsule ottenute a seguito di entrambe le tecniche chirurgiche di cataratta, i campioni sono stati elaborati per le analisi di contrasto di fase, istologiche e di microscopia elettronica a scansione. Parte dei campioni sono stati fissati con paraformaldeide al 4% (PFA) in PBS per 20 minuti a temperatura ambiente. Poi, i campioni sono stati lavati tre volte con PBS e sono stati osservati utilizzando un microscopio invertito Nikon Eclipse TE2000-U. Immagini rappresentative di contrasto di fase sono state acquisite con una fotocamera CCD Hamamatsu ORCA 285. Successivamente, i campioni sono stati trattati per l’analisi istologica, sottoponendoli a disidratazione con etanolo graduato, pulizia e inclusione in paraffina. Per ogni campione sono state tagliate sezioni seriali di cinque μm di spessore e la colorazione ematossilina/eosina (H&E) di routine è stata eseguita per analizzare i dettagli morfologici e misurare lo spessore delle capsule anteriori.

Un’altra parte dei campioni raccolti è stata lavata, subito dopo le procedure chirurgiche, con tampone fosfato di Sorenson (PB) 0,1 M pH 7,4 e fissata con glutaraldeide 1% in PB 0,1 M pH 7,4. Dopo tre lavaggi in PB, i campioni della capsula del cristallino anteriore sono stati disidratati con etanolo graduato, fino all’osservazione al SEM. Le immagini SEM sono state acquisite con un microscopio elettronico a scansione (SEM) Nova NanoSEM 450 (FEI).

Lo scopo principale di queste analisi era la valutazione dello strato di cellule epiteliali, la presenza di frange nei bordi della capsula e la rugosità/lisciatura dei bordi.

2.3. Valutazione dell’apoptosi in LECs

Al fine di valutare se l’apoptosi si è verificato in cellule epiteliali del cristallino che aderiscono alla capsula anteriore del cristallino dopo l’approccio chirurgico B-MICS e dopo il rilascio di energia dell’impulso dal laser a femtosecondi, i campioni sono stati elaborati per l’analisi di immunofluorescenza confocale, come precedentemente descritto. Brevemente, le capsule fissate con 4% sono state lavate con PBS e sottoposte a saturazione con PBS contenente 3% di sieroalbumina bovina (BSA) per 30 minuti a temperatura ambiente. Poi, i campioni sono stati incubati con un anticorpo primario di coniglio anti-cleaved caspase 3 (Cell Signaling) diluito 1 : 50 in PBS contenente 3% BSA, per 1 ora a temperatura ambiente. Dopo il lavaggio in PBS contenente il 3% di BSA, i campioni sono stati incubati con un anticorpo secondario di capra anti-rabbit Alexa546 (Life Technologies), diluito 1 : 200 in PBS contenente il 3% di BSA. I campioni sono stati poi lavati con PBS, colorati con 1 mg/ml 4′,6-diamidino-2-fenilindolo (DAPI) in PBS per 1 minuto, e poi montati con un mezzo antifading. I campioni fluorescenti sono stati osservati da un microscopio a scansione laser confocale Nikon A1. Le sezioni seriali confocali sono state elaborate con il software ImageJ per ottenere proiezioni tridimensionali e il rendering delle immagini è stato eseguito utilizzando Adobe Photoshop Software. Analisi statistica

I dati sono stati valutati dal software statistico (GraphPad Prism Software versione 7 Inc., San Diego, CA, USA). Le differenze tra i due gruppi sperimentali sono state analizzate con il test di Student. I dati sono stati espressi come media ± SD. Ogni valutazione sperimentale è stata eseguita in triplicato. In ogni caso, la significatività è stata fissata a .

3. Risultati

3.1. Osservazioni cliniche

Per il gruppo 1 (FLACS), sono stati inclusi nello studio 30 occhi (15 occhi destri e 15 occhi sinistri) di 30 pazienti (10 maschi e 20 femmine); l’età media era di 74,07 ± 8,48 anni. Per il gruppo 2 (B-MICS), 30 occhi (13 destri e 17 sinistri) di 30 pazienti (8 maschi e 22 femmine) sono stati inclusi nello studio; l’età media era di 75,72 ± 9,16 anni. BunnyLens AF IOL è stata impiantata in tutti gli occhi. Tutte le IOL sono state impiantate nel sacco.

Il tempo chirurgico totale è stato di 17,89 ± 3,80 minuti nel Gruppo 1, mentre nel Gruppo 2 è stato di 12,63 ± 2,10 minuti, con una differenza risultante essere statisticamente significativa (). Nel gruppo 1, non sono stati osservati né capsulotomia incompleta né bottoni capsulari; inoltre, nessuna complicazione maggiore intraoperatoria né alcuna complicazione postoperatoria è stata registrata in entrambi i gruppi.

Tre mesi dopo l’intervento, un miglioramento BCVA medio di 0,460 ± 0,249 LogMar è stato osservato nel gruppo 1 (rispetto ai valori basali). Allo stesso modo, nel Gruppo 2 è stato osservato un miglioramento medio della BCVA di 0,417 ± 0,150 LogMar (rispetto ai valori basali), allo stesso tempo di valutazione. Non sono state osservate differenze statisticamente significative nel miglioramento dell’acuità visiva tra i due gruppi.

Per quanto riguarda l’astigmatismo e la pachimetria corneale, non abbiamo rilevato alcuna differenza statisticamente significativa tra i valori basali e quelli postoperatori, con il test di Student né all’interno di ciascun gruppo né tra i due gruppi ().

Infine, per quanto riguarda la conta delle cellule endoteliali (ECC), nel gruppo 1 a 3 mesi di follow-up abbiamo trovato una perdita media di cellule endoteliali di 162,27 ± 225,11 cellule/mm2 e di 322,52 ± 339,93 cellule/mm2 dopo l’intervento nel gruppo 2, una riduzione che era statisticamente significativa sia all’interno di ciascun gruppo o tra i due gruppi ().

3.2. Analisi morfologica: Analisi di contrasto di fase, istologica e microscopia elettronica a scansione

Le immagini di contrasto di fase hanno mostrato cellule epiteliali con nuclei e citoplasma ben conservati, oltre a rivelare i bordi cellulari intatti attraverso la maggior parte della superficie epiteliale, ad eccezione della vicinanza dei bordi delle capsule, dove le cellule epiteliali erano staccate dalla membrana basale (Figura 2(a)). I bordi delle capsule apparivano regolari e lisci, come riportato nella Figura 2(a). Per quanto riguarda l’aspetto capsulare nel gruppo FLACS, le cellule epiteliali erano per lo più aderenti alla membrana basale mentre i bordi mostravano un modello meno regolare, a denti di sega (Figura 2(b)). L’analisi istologica ha confermato che alcuni dei campioni del gruppo B-MICS hanno mostrato un parziale distacco dello strato epiteliale dalla membrana basale, mentre la maggior parte delle capsule del gruppo FLACS ha dimostrato un’adesione continua delle cellule epiteliali e della membrana basale (Figura 3). Inoltre, le misurazioni dello spessore capsulare tra i due gruppi sperimentali hanno rivelato una differenza, anche se senza significatività statistica. In particolare, i campioni ottenuti dopo la tecnica FLACS hanno mostrato uno spessore maggiore rispetto alle capsule derivate dalla B-MICS (dati non mostrati).

(a)
(a)
(b)
(b)

(a)
(a)(b)
(b)

Figura 2
Valutazione istomorfologica delle capsule del cristallino anteriore. Immagini a contrasto di fase che mostrano i bordi e lo strato epiteliale delle capsule del cristallino anteriore ottenute dalla tecnica B-MICS (a) e dalla chirurgia della cataratta assistita dal laser a femtosecondi (b). Bar: 100 μm.

Figura 3
Analisi istologica delle capsule della lente anteriore. Le sezioni trasversali dei campioni sono state colorate con ematossilina ed eosina. Sul lato destro, le immagini a più alto ingrandimento mostrano i dettagli dello strato epiteliale in campioni ottenuti secondo le tecniche B-MICS e FLACS. Barra: 10 μm.

Infine, l’analisi al SEM, come riportato in Figura 4, ha rivelato con una maggiore definizione quanto fosse uniforme l’adesione delle cellule epiteliali alla membrana basale e, soprattutto, la comparsa di bordi capsulari. In particolare, nel gruppo B-MICS, i bordi capsulari avevano un bordo regolare, liscio e traslucido (Figura 4(a)). Altrimenti, i margini delle capsule ottenute tramite FLACS dimostravano chiaramente un aspetto irregolare e sfrangiato (Figura 4(b)).

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(b)

(a)
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(b)

Figura 4
Analisi al microscopio elettronico a scansione. Immagini rappresentative di campioni ottenuti con le tecniche B-MICS (a) e (b) FLACS, mostrando strato epiteliale (sinistra) e aspetto dei bordi (destra) a diversi ingrandimenti.

3.3. Valutazione di apoptosi in LECs

L’analisi di immunofluorescenza confocale ha rivelato che l’apoptosi si è verificato in cellule epiteliali della lente di campioni ottenuti dal gruppo B-MICS o il gruppo FLACS, come mostrato nella Figura 5 (a). Mentre nelle capsule ottenute con la tecnica chirurgica manuale la presenza della caspasi scissa 3 è stata osservata principalmente nelle cellule epiteliali più vicine ai bordi della capsula, i campioni raccolti in seguito alla tecnica FLACS hanno mostrato una colorazione più diffusa contro la caspasi scissa 3, dal bordo al nucleo dello strato epiteliale. Le immagini pseudocolori della caspasi 3 scissa sono state ottenute come precedentemente descritto e riportate nella Figura 5(b). L’analisi densitometrica effettuata sui segnali immunofluorescenti ha fornito dati semiquantitativi dell’espressione dell’effettore apoptotico caspasi scissa 3, che era statisticamente significativamente superiore nel gruppo FLACS, rispetto al gruppo B-MICS (Figura 5 (b); ).

(a)
(a)
(b)
(b)

(a)
(a)(b)
(b)

Figura 5
Valutazione dell’apoptosi cellulare in cellule epiteliali aderenti alle capsule della lente anteriore. (a) L’analisi di immunofluorescenza è stata eseguita contro la caspasi scissa 3 (rosso), e i nuclei sono stati controcolorati con DAPI (blu). (b) Immagini pseudocolore (in alto) e analisi densitometrica (in basso) della caspasi scissa 3 nelle cellule epiteliali. Bar: 20 μm.

4. Discussione

L’uso di laser a femtosecondi costituisce la più recente conquista nella chirurgia della cataratta, a partire dalla loro prima applicazione clinica nel 2008. A causa della crescente necessità di soddisfare le aspettative di un risultato refrattivo ottimale, sono stati realizzati molti nuovi sviluppi.

L’applicazione del laser a femtosecondi alla chirurgia della cataratta ha permesso di migliorare la sicurezza e l’efficacia della procedura, come ben documentato in letteratura. Infatti, i rapporti precedenti hanno dimostrato l’alta ripetibilità e precisione nell’esecuzione delle fasi più difficili della chirurgia della cataratta, comprese le capsulotomie anteriori ottimizzate che hanno prodotto un taglio continuo a spigoli vivi con una buona resistenza alla trazione.

Il nostro studio ha valutato le caratteristiche morfologiche delle capsule anteriori umane ottenute con la tecnica di facoemulsificazione standard e FLACS, rispettivamente. Questi ultimi sono stati raccolti in seguito all’uso di Ziemer LDV Z8, un laser a femtosecondi che sfrutta un sistema a bassa energia e alta frequenza (alta frequenza di ripetizione degli impulsi fino a 10 MHz, combinata con una gamma di energia molto bassa di 100-150 nJ) e utilizza un’interfaccia ottica liquida per facilitare le fasi di capsulotomia e frammentazione della lente. Queste proprietà hanno permesso di ottenere campioni di capsula anteriore che possiedono un’istomorfologia ben conservata, con cellule epiteliali uniformemente aderenti, rispetto ai campioni ottenuti dopo la tecnica manuale, come dimostrato dal contrasto di fase e dalle analisi SEM. In accordo con la letteratura esistente, i bordi delle capsule anteriori derivate dalla FLACS erano meno regolari e caratterizzati da un modello a dente di sega, rispetto al bordo liscio prodotto dalla tecnica manuale. Il modello osservato nel gruppo FLACS è molto probabilmente attribuibile al raster di impulsi ad alta densità e all’ottica di alta precisione del laser Femto LDV Z8, che si traduce in più punti sovrapposti che creano un taglio pulito continuo, simile a quello ottenuto con la tecnica B-MICS.

I campioni di capsula anteriore ottenuti con la tecnica FLACS hanno anche mostrato uno spessore maggiore, rispetto alle capsule derivate dalla B-MICS, molto probabilmente a causa della presenza di corteccia aderente alla capsula anteriore.

Oltre alle caratteristiche istomorfologiche, i nostri dati hanno dimostrato che l’apoptosi è avvenuta nelle cellule epiteliali delle capsule anteriori ottenute da entrambe le tecniche chirurgiche. In particolare, l’espressione della caspasi scissa 3 era significativamente più alta nei campioni raccolti dopo la FLACS, con una colorazione positiva non limitata alle cellule lungo il bordo di taglio ma diffusa anche al nucleo interno della capsula, suggerendo così una più ampia induzione di morte cellulare. Al contrario, nello strato epiteliale aderente ai campioni di capsula derivati dalla procedura B-MICS, l’apoptosi è stata rilevata solo lungo il bordo di taglio, come conseguenza della lesione meccanica indotta dall’estrazione mediata dal forcipe della capsula anteriore. Questo maggiore evento apoptotico che colpisce l’epitelio monostrato sotto la capsula anteriore dopo FLACS è probabilmente dovuto all’energia dell’impulso laser, alla formazione di plasma dipendente dalla fotodisruzione e alla successiva creazione di bolle di cavitazione. I nostri dati sono coerenti con i risultati precedenti di Mayer et al. e, in particolare, una diffusa espressione dell’effettore apoptotico caspasi scissa 3 potrebbe rappresentare un fattore predittivo positivo che permette di prevenire l’opacizzazione del sacco capsulare, inibendo fortemente la proliferazione delle cellule epiteliali residue che generalmente si correla alla risposta infiammatoria postoperatoria. Da un punto di vista clinico il nostro studio ha evidenziato che, 3 mesi dopo l’intervento, i pazienti dei gruppi FLACS o B-MICS hanno mostrato un miglioramento statisticamente significativo nei valori di acuità visiva meglio corretta (BCVA), rispetto alle misurazioni di base. Degno di nota, per quanto riguarda la conta delle cellule endoteliali, una diminuzione statisticamente significativa della perdita di cellule endoteliali corneali è stata osservata nel gruppo FLACS, evento che è attribuibile a tempi di facoemulsificazione più brevi. Questi dati sono in accordo con i risultati precedenti che dimostrano che la chirurgia della cataratta laser è meno traumatica per l’endotelio corneale oltre ad offrire uno strumento per i chirurghi per standardizzare le fasi critiche della chirurgia della cataratta, attraverso una curva di apprendimento iniziale. Conclusioni

L’uso del laser a femtosecondi nella chirurgia della cataratta permette di ottimizzare alcune delle fasi più difficili della procedura, tra cui la capsulotomia, la frammentazione nucleare e le incisioni corneali, oltre a fornire risultati più accurati e ripetibili. I nostri risultati sono in accordo con la letteratura esistente; tuttavia saranno necessari ulteriori studi per abbinare i lati positivi della tecnica manuale e del laser a femtosecondi, definendo la combinazione ottimale di energia laser, frequenza di ripetizione e dimensione dello spot, al fine di ottenere capsulotomie di migliore qualità con bordi di taglio regolari paragonabili a quelli della capsuloresi manuale, e di ridurre la risposta infiammatoria nell’occhio, impedendo così la proliferazione delle cellule epiteliali del cristallino e l’opacizzazione del sacco capsulare.

Abbreviazioni

FLACS: Femtosecond assisted laser cataract surgery
B-MICS: Bimanual microincision cataract surgery
mCCC: Capsuloresi curvilinea continua manuale
IOL: Lente intraoculare
PCO: Opacificazione della capsula posteriore
BSS: Soluzione salina bilanciata
OCT: Tomografia a coerenza ottica
OVD: dispositivo viscoelastico oculare
PBS: Tampone fosfato salino
PFA: Paraformaldeide
H&E: Haematoxylin/eosina
SEM: Microscopio elettronico a scansione
BSA: Bovine serum albumin
DAPI: 4′,6-Diamidino-2-phenylindole.

Disclosure

Questo lavoro è stato presentato in parte al 20° meeting AICCER 2017 (Associazione Italiana di Chirurgia della Cataratta e Refrattiva), 9-11 marzo, Rimini (Italia), 2017.

Conflitti di interesse

Gli autori dichiarano che non esistono conflitti di interesse finanziari.

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