Dans de nombreux cas, l’utilisation de matériel radiomarqué (PAIRA-Pure Active Ingredient, Radiolabelled) est considérée comme obligatoire et le choix du radiomarqueur est normalement l’isotope 14 du carbone. Dans certains cas, le tritium peut être utilisé mais son utilisation est découragée, voire interdite, car un échange hydrogène-tritium peut se produire rendant l’interprétation des données difficile.
Raisons du choix du carbone-14
- Le 14C est l’isotope réglementaire de choix
- Il a une longue demi-vie.vie -donc il n’est pas nécessaire de corriger la décroissance dans les études prolongées
- Position(s) définie(s) du marqueur dans la structure centrale de la molécule
- Les composés peuvent être préparés en utilisant une synthèse personnalisée sur mesure
- Fournit une méthode très sensible pour la détection qui est Quantitative. & Qualitative
- permet de suivre le devenir du parent et des métabolites et d’élucider les voies
- Les contrôles de qualité critiques, y compris les BPL, soutiennent son utilisation dans les études réglementaires
Exemples de directives qui mettent en évidence la nature du radiomarqueur et du carbone-.14 spécifiquement :
Les radiomarques sont positionnées sur des sites (un ou plusieurs selon les besoins), pour faciliter l’élucidation des voies métaboliques et de transformation et pour faciliter l’étude de la distribution de la substance active et de ses métabolites, produits de réaction et de dégradation (UE 283/2013).
Des données sur le métabolisme accompagnées d’un schéma des voies métaboliques chez les plantes et les animaux sont requises et ces études doivent être menées avec une ou plusieurs formes radiomarquées de la substance active et, le cas échéant, des formes stéréoisomères de la substance active et de ses métabolites (UE 283/2013).
Les radiomarquages sont requis pour permettre la quantification des résidus totaux extractibles et non extraits et le 14C est l’isotope préféré pour les études sur les résidus (OCDE 501).
Le matériel marqué au 14C est un prérequis pour certaines études (OCDE 304A).
L’atome de 14C doit se trouver dans la partie la plus récalcitrante de la molécule (OCDE 314)
Si le composé présente des structures cycliques, il faut alors réaliser des expériences séparément sur chaque cycle, avec pas plus d’une structure cyclique marquée dans chaque expérience (OCSPP 850 170 & 1730).
Des études séparées reflétant le marquage de chaque anneau seront normalement requises (OCDE 502) si un clivage de la molécule se produit – en plus du radiomarquage, l’utilisation d’isotopes stables est encouragée.
Le radiomarquage peut être préféré pour les études dans le fumier, où l’anneau phényle U-14C est particulièrement préféré, car le 14C CO2 et les volatiles 14C tels que le 14CH4 doivent être piégés (EMA/CVMP 2009/430327).
Le 14C doit être utilisé pour tous les bilans de masse et l’identification des métabolites, sauf si la sensibilité de la spécificité analytique est au moins aussi bonne que la sensibilité du radiomarqueur et fournit des informations adéquates sur le bilan de masse et l’identification des métabolites. Le marquage doit se trouver dans la partie centrale de la molécule et un marquage multiple peut être nécessaire pour suivre le devenir métabolique (OCDE 417).
L’utilisation d’un Radiolabel peut être facultative mais est préférée par exemple dans les études de bioaccumulation car elle peut faciliter l’analyse (OCDE 305, OCDE 315 & 317).
Le tritium est souvent fortement déconseillé (OPPTS 860.1300), ne doit pas être utilisé (SANCO/11187/2013) ou interdit (OCDE 507).
Le 14C est recommandé dans certains tests (OCDE 309).