Les marqueurs de fusion – séquences d’acides aminés qui sont génétiquement codées pour être exprimées en tant que parties attachées à une protéine – ont le potentiel d’améliorer l’activité de l’enzyme native, permettre une purification spécifique de l’enzyme, et promouvoir une immobilisation simple et efficace des enzymes sur des supports matériels. Dans ce travail, nous démontrons l’effet d’une étiquette de fusion Strep-tag II sur les propriétés de la lipase B de Candida antarctica (CALB) libre et immobilisée. Le gène codant pour la partie mature de CALB a été optimisé au niveau du codon et cloné dans le plasmide pASG-IBA2 pour être exprimé dans E. coli. Le Strep-tag II CALB recombinant purifié a été immobilisé sur un support à base de Strep-Tactin par liaison d’affinité, et le Strep-tag II CALB immobilisé et libre a été comparé à un CALB commercial. Après modification, l’enzyme a pu être purifiée de manière sélective à partir de milieux de culture sans qu’aucune liaison non spécifique ne soit observable. L’efficacité catalytique de l’enzyme purifiée et marquée par fusion était significativement supérieure à celle de la CALB commerciale sous sa forme libre. L’immobilisation de l’enzyme marquée par fusion sur un support d’agarose réticulé modifié par Strep-Tactin a permis d’obtenir une enzyme catalytiquement active ; cependant, le kcat de l’enzyme immobilisée était considérablement réduit par rapport à celui de l’enzyme marquée libre. Ces travaux indiquent qu’une étiquette de fusion Strep-tag II à l’extrémité C-terminale peut être utilisée pour améliorer l’efficacité catalytique de la CALB libre, mais qu’elle peut ne pas convenir aux applications immobilisées qui utilisent la liaison de l’enzyme à un support modifié par Strep-Tactin.

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