En muchos casos se considera obligatorio el uso de material radiomarcado (PAIRA-Pure Active Ingredient, Radiolabelled) y la elección del radiolabel es normalmente el isótopo de carbono 14. En algunos casos puede utilizarse el tritio, pero se desaconseja su uso, o incluso se prohíbe, ya que puede producirse un intercambio hidrógeno-tritio que dificulte la interpretación de los datos.
Razones para elegir el carbono-14
- El 14C es el isótopo regulador de elección
- Tiene una larga vida mediavida media larga, por lo que no es necesario corregir la desintegración en estudios prolongados
- Posición(es) definida(s) de la etiqueta en la estructura central de la molécula
- Los compuestos pueden prepararse utilizando una síntesis personalizada a medida
- Proporciona un método altamente sensible para la detección que es cuantitativa & Cualitativo
- Permite seguir el destino del progenitor y de los metabolitos y dilucidar las vías
- Los controles de calidad críticos, incluidas las BPL, respaldan su uso en los estudios reglamentarios
Ejemplos de orientaciones que destacan la naturaleza del radiomarcador y del carbono-14 específicamente:
Los radiomarcadores se colocarán en sitios (uno o más según sea necesario), para facilitar la elucidación de las vías metabólicas y de transformación y para facilitar la investigación de la distribución de la sustancia activa y de sus metabolitos, productos de reacción y descomposición (UE 283/2013).
Se requieren datos sobre el metabolismo junto con un diagrama esquemático de las vías metabólicas en plantas y animales, y estos estudios se llevarán a cabo con una o más formas radiomarcadas de la sustancia activa y, en su caso, con formas estereoisómeras de la sustancia activa y sus metabolitos (UE 283/2013).
Se requieren radiomarcadores para permitir la cuantificación de los residuos totales extraíbles y no extraídos, y el 14C es el isótopo preferido para los estudios de residuos (OCDE 501).
El material etiquetado con 14C es un requisito previo para algunos estudios (OCDE 304A).
El átomo de 14C debe estar en la porción más recalcitrante de la molécula (OCDE 314)
Si el compuesto tiene estructuras de anillo, entonces realice los experimentos por separado en cada anillo con no más de una estructura de anillo etiquetada en cada experimento (OCSPP 850 170 & 1730).
Normalmente se requerirán estudios separados que reflejen el etiquetado de cada anillo (OCDE 502) si se produce la escisión de la molécula – además de la etiqueta radiactiva, se fomenta el uso de isótopos estables.
Se puede preferir la etiqueta radiactiva para los estudios en el estiércol, donde se prefiere especialmente el anillo de fenilo U-14C, ya que el CO2 14C y los volátiles 14C como el 14CH4 deben ser atrapados (EMA/CVMP 2009/430327).
El 14C debe utilizarse para todo el balance de masas y la identificación de metabolitos a menos que la sensibilidad de la especificidad analítica sea al menos tan buena como la sensibilidad de la etiqueta radiactiva y proporcione información adecuada sobre el balance de masas y la identificación de metabolitos. La etiqueta debe estar en la parte central de la molécula y puede ser necesario el etiquetado múltiple para seguir el destino metabólico (OCDE 417).
El uso de una etiqueta radiológica puede ser opcional pero se prefiere, por ejemplo, en los estudios de bioacumulación, ya que puede facilitar el análisis (OCDE 305, OCDE 315 & 317).
El tritio suele estar muy desaconsejado (OPPTS 860.1300), no debe utilizarse (SANCO/11187/2013) o está prohibido (OCDE 507).
El 14C se recomienda en algunos ensayos (OCDE 309).