Abstract
5-5′’-Ácido ditiobenzoico (DTNB o reactivo de Ellman; ref. 1) reacciona con la cadena lateral sulfhidrila libre de la cisteína para formar un enlace S-S entre la proteína y un residuo de ácido tionitrobenzoico (TNB). La modificación es generalmente rápida y selectiva. La principal ventaja del DTNB sobre otros reactivos alternativos (por ejemplo, la N-etilmaleimida o la yodoacetamida) radica en la selectividad de este reactivo y en la posibilidad de seguir el curso de la reacción espectrofotométricamente. La reacción suele realizarse a pH 7,0-8,0 y la modificación es estable en condiciones oxidativas. El grupo TNB puede liberarse de la proteína modificada mediante el tratamiento con reactivos que se utilizan habitualmente para reducir los enlaces S-S, por ejemplo, mercaptoetanol, o mediante cianuro de potasio (2) (véase la nota 1). Además, las diferencias, a menudo muy pronunciadas, en la reactividad de diferentes cadenas laterales de cisteína en la misma proteína o incluso en el sitio activo, y la disponibilidad de una variedad de reactivos modificadores de tioles pueden aprovecharse para modificar selectivamente las cadenas laterales de cisteína en las proteínas en presencia de otros residuos de cisteína más reactivos (3).