La miniaturización de los ensayos de cribado de alto rendimiento (HTS) ha sido una estrategia ampliamente debatida e investigada con el objetivo de reducir los costes de cribado y aumentar la velocidad sin comprometer la calidad de los datos. En este contexto, las tecnologías de manipulación de líquidos siguen mejorando. Un desarrollo nuevo y prometedor es la aparición de dispensadores de nanolitros, que son capaces de transferir directamente los compuestos a las microplacas de ensayo. En este estudio, investigamos la miniaturización de un ensayo de quinasa HTS y comparamos el rendimiento en la vida real de la tecnología actual de transferencia por desplazamiento de aire (sistema MiniTrak V) y un dispensador de nanolitros basado en capilares (CyBi-HummingWell). Se comparó la solidez y la eficacia de los formatos de ensayo miniaturizados mediante el ensayo de estaurosporina para generar curvas dosis-respuesta y 340 compuestos activos previamente identificados. Utilizando el dispositivo MiniTrak, se logró la miniaturización del ensayo de 18 microL a 6 microL en formatos de placa de 384 pocillos y 1536 pocillos. Utilizando el dispensador de nanolitros, la miniaturización se realizó hasta 5 microL en placas de 1536 pocillos. Los factores Z’ obtenidos para cada formato de ensayo fueron sistemáticamente superiores a 0,5. Los datos presentados aquí describen la reproducibilidad de los resultados obtenidos con las dos tecnologías de transferencia y ponen de relieve posibles problemas para la identificación de aciertos.