In vielen Fällen wird die Verwendung von radiomarkiertem Material (PAIRA-Pure Active Ingredient, Radiolabelled) als obligatorisch angesehen, und die Wahl des Radiomarkers ist normalerweise das Kohlenstoff-14-Isotop. In einigen Fällen kann Tritium verwendet werden, doch wird von seiner Verwendung abgeraten oder sie ist sogar verboten, da es zu einem Wasserstoff-Tritium-Austausch kommen kann, der die Interpretation der Daten erschwert.
Gründe für die Wahl von Kohlenstoff-14
- 14C ist das Isotop der Wahl
- Es hat eine lange HalbwertszeitEs hat eine lange Halbwertszeit – daher ist es nicht erforderlich, den Zerfall in ausgedehnten Studien zu korrigieren
- Definierte Markierungsposition(en) in der Kernstruktur des Moleküls
- Verbindungen können durch maßgeschneiderte kundenspezifische Synthese hergestellt werden
- Bietet eine hochempfindliche Methode für den Nachweis, die quantitativ ist & Qualitativ
- Ermöglicht die Verfolgung des Verbleibs von Ausgangsstoffen und Metaboliten und die Aufklärung von Stoffwechselwegen
- Kritische Qualitätskontrollen, einschließlich GLP, unterstützen den Einsatz in behördlichen Studien
Beispiele für Anleitungen, die die Art des radioaktiven Markers und des Kohlenstoffs hervorheben14 speziell hervorhebt:
Radiomarker werden an Stellen angebracht (je nach Bedarf eine oder mehrere), um die Aufklärung von Stoffwechsel- und Transformationswegen und die Untersuchung der Verteilung des Wirkstoffs und seiner Metaboliten, Reaktions- und Abbauprodukte zu erleichtern (EU 283/2013).
Daten über den Metabolismus zusammen mit einem schematischen Diagramm der Stoffwechselwege in Pflanzen und Tieren sind erforderlich, und diese Studien müssen mit einer oder mehreren radioaktiv markierten Formen des Wirkstoffs und gegebenenfalls mit stereoisomeren Formen des Wirkstoffs und seiner Metaboliten durchgeführt werden (EU 283/2013).
Radiomarkierungen sind erforderlich, um die Quantifizierung der gesamten extrahierbaren und nicht extrahierten Rückstände zu ermöglichen, und 14C ist das bevorzugte Isotop für Rückstandsstudien (OECD 501).
14C-markiertes Material ist eine Voraussetzung für einige Studien (OECD 304A).
Das 14C-Atom sollte sich im widerspenstigsten Teil des Moleküls befinden (OECD 314)
Wenn die Verbindung Ringstrukturen aufweist, sind die Versuche für jeden Ring getrennt durchzuführen, wobei in jedem Versuch nicht mehr als eine Ringstruktur markiert werden darf (OCSPP 850 170 & 1730).
Wenn eine Spaltung des Moleküls auftritt, sind in der Regel getrennte Studien erforderlich, die die Markierung jedes Rings widerspiegeln (OECD 502) – zusätzlich zu Radiomarkern wird die Verwendung stabiler Isotope empfohlen.
Radiomarker können für Studien in Gülle bevorzugt werden, wobei der Phenylring U-14C besonders zu bevorzugen ist, da 14C CO2 und 14C flüchtige Stoffe wie 14CH4 eingefangen werden müssen (EMA/CVMP 2009/430327).
14C sollte für alle Massenbilanz- und Metaboliten-Identifizierungen verwendet werden, es sei denn, die Sensitivität der analytischen Spezifität ist mindestens so gut wie die Sensitivität des Radiolabels und liefert adäquate Massenbilanz- und Met-ID-Informationen. Die Markierung sollte sich im Kernbereich des Moleküls befinden, und es kann eine mehrfache Markierung erforderlich sein, um das metabolische Schicksal zu verfolgen (OECD 417).
Die Verwendung eines Radiolabels kann fakultativ sein, wird aber beispielsweise bei Bioakkumulationsstudien bevorzugt, da es die Analyse erleichtern kann (OECD 305, OECD 315 & 317).
Von Tritium wird oft dringend abgeraten (OPPTS 860.1300), es soll nicht verwendet werden (SANCO/11187/2013) oder ist verboten (OECD 507).
14C wird in einigen Tests empfohlen (OECD 309).