Fusion Tags – Aminosäuresequenzen, die genetisch kodiert sind, um als an ein Protein angehängte Einheiten exprimiert zu werden – haben das Potenzial, die Aktivität eines nativen Enzyms zu erhöhen, eine spezifische Reinigung des Enzyms zu ermöglichen und die einfache und effiziente Immobilisierung von Enzymen auf Materialträgern zu fördern. In dieser Arbeit zeigen wir die Wirkung eines Strep-Tag II Fusions-Tags auf die Eigenschaften der freien und immobilisierten Lipase B aus Candida antarctica (CALB). Das Gen, das für den reifen Teil von CALB kodiert, wurde kodon-optimiert und in das pASG-IBA2-Plasmid zur Expression in E. coli kloniert. Gereinigtes rekombinantes Strep-tag II CALB wurde durch Affinitätsbindung an einen Träger auf Strep-Tactin-Basis immobilisiert, und das immobilisierte und freie Strep-tag II CALB wurden mit einem kommerziellen CALB verglichen. Nach der Modifizierung konnte das Enzym selektiv aus Kulturmedien gereinigt werden, ohne dass eine unspezifische Bindung festgestellt wurde. Die katalytische Effizienz des gereinigten fusion-tagged Enzyms war deutlich höher als die des kommerziellen CALB in seiner freien Form. Die Immobilisierung des fusionsmarkierten Enzyms auf einem mit Strep-Tactin modifizierten, vernetzten Agaroseträger ergab ein katalytisch aktives Enzym; allerdings war die kcat des immobilisierten Enzyms im Vergleich zum freien markierten Enzym deutlich reduziert. Diese Arbeit zeigt, dass ein C-terminaler Strep-Tag II Fusions-Tag zur Verbesserung der katalytischen Effizienz von freiem CALB eingesetzt werden kann, aber möglicherweise nicht für immobilisierte Anwendungen geeignet ist, bei denen das Enzym an einen Strep-Tactin-modifizierten Träger gebunden wird.

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