Abstrakt

Cíl. Srovnání morfologických vlastností předního pouzdra a indukce apoptózy v epiteliálních buňkách po femtosekundové laserem asistované operaci katarakty (FLACS) a standardní fakoemulzifikační operaci. Metody. Skupina 1: 30 předních kapsulotomií FLACS a skupina 2: 30 manuálních předních kontinuálních zakřivených kapsulorhexí. Všechny pacienty operoval stejný zkušený chirurg. Byly hodnoceny morfologické vlastnosti předních kapsul a indukce apoptózy v epiteliálních buňkách. Výsledky. U všech pacientů došlo 3 měsíce po operaci k významnému průměrnému zlepšení nejlépe korigované zrakové ostrosti (BCVA) a nevyskytly se žádné závažné intraoperační ani pooperační komplikace. Kapsulární epitel se zdál být zachován v obou skupinách. Analýza skenovací elektronovou mikroskopií odhalila u kapsulí ze skupiny 1 nepravidelné okraje ve tvaru zubů pily, zatímco kapsle ze skupiny 2 vykazovaly pravidelné a hladké okraje. Statisticky významně vyšší exprese následného apoptotického efektoru štěpené kaspázy 3 byla pozorována u skupiny 1. Závěry. Pilovitý vzhled byl pravděpodobně způsoben postupnou sekvencí laserových pulzů na kapsli. Nízkoenergetické/vysokofrekvenční vlastnosti laserového pulzu v kombinaci s překrývajícím se vzorem pulzů vedly k vysoce kontinuální morfologii okrajů kapsuly. Vyšší indukce apoptózy ve skupině FLACS mohla být způsobena generací plazmatu v závislosti na fotodisrupci a tvorbou kavitačních bublin.

1. Úvod

Chirurgie katarakty je celosvětově nejčastěji prováděným chirurgickým zákrokem, přičemž počet chirurgických zákroků se podle odhadů WHO zvyšuje až na 24 milionů ročně .

Po několik let je fakoemulzifikační technika standardní metodou extrakce katarakty a díky neustálému technickému zdokonalování, jako jsou průhledné rohovkové mikroincize, používání skládacích nitroočních čoček a použití nižší energie ultrazvuku pro fragmentaci čočky, je operace katarakty účinná a bezpečná. Bimanuální mikroincizní operace katarakty (B-MICS) je minimálně invazivní varianta tradiční koaxiální fakoemulzifikace, která umožňuje průhledné rohovkové mikroincize o velikosti 1,4 mm, používá bezrukávový fako hrot s odděleným irigačním vrtákem, který poskytuje vyšší stabilitu přední komory a možnost použití pravé i levé ruky během operačního zákroku .

Nejnovější aktualizací v chirurgii katarakty bylo zavedení technologie femtosekundového laseru. Počínaje femtosekundovými lasery, které byly poprvé zavedeny pro operace rohovky s cílem vytvořit rohovkové laloky pro refrakční chirurgii, většina femtosekundových laserů nejnovější generace pracuje v chirurgii katarakty s opakovací frekvencí až 160 kHz v kombinaci s energetickým rozsahem maximálně 10-15 μJ .

Na základě principů fotodisrupce nám tyto typy laserů umožňují optimálně standardizovat některé z nejobtížnějších částí zákroku, včetně kapsulotomie, fragmentace jader a rohovkových řezů, a kromě toho poskytují přesnější a reprodukovatelnější výsledky ve srovnání s manuálními přístupy .

Do nástupu technologie femtosekundového laseru byla standardní metodou pro otevření předního pouzdra při operaci katarakty nebo refrakční výměně čočky manuální kontinuální kurvilineární kapsulorexe (mCCC). Femtosekundová laserem asistovaná operace katarakty (FLACS) nyní přinesla revoluci v tomto důležitém chirurgickém kroku a vytváří předvídatelné a křivočaré kapsulotomie, jejichž výsledkem je lepší překrytí kapsuly a nitrooční čočky (IOL) a lepší centrace a poloha IOL než při manuální technice. Předchozí zjištění zejména prokázala, že kapsulotomie FLACS mají opakovatelnou a přesnou velikost, jsou centrované a v důsledku toho poskytují lepší centraci IOL a snižují pravděpodobnost náklonu IOL .

Několik studií zkoumalo morfologii okrajů a hladkost kapsulotomií FLACS, které jsou vytvářeny specifickou vlnovou délkou laseru, energií pulzu, dobou trvání pulzu, vzorem pulzu, opakovací frekvencí a velikostí bodu . Předběžné analýzy kapsul ukázaly aspekt poštovního razítka s výraznou drsností, pravděpodobně způsobenou několika faktory, včetně energie laseru použité k vytvoření kapsulotomie .

Zadní opacifikace kapsuly (PCO) je navíc jednou z nejčastěji se opakujících dlouhodobých komplikací operace katarakty. Dosud bylo provedeno mnoho studií s cílem definovat, které faktory mohou mít vliv na vznik PCO, včetně konstrukce IOL, podávání terapeutických látek, samotné chirurgické techniky a dalších chirurgických postupů k vyčištění zadního pouzdra .

Jak se uvádí v literatuře, pouzdro čočky je při kapsulorexi nebo kapsulotomii vystaveno mechanickému nebo fotodisruptivnímu poškození s následným odumřením epiteliálních buněk. Předpokládá se, že femtosekundový laser by mohl přiměřeně vyvolat apoptózu ve větší míře.

Cílem této studie bylo zhodnotit morfologické vlastnosti předního pouzdra lidské čočky, a to i na ultrastrukturální úrovni, po operaci katarakty provedené manuální technikou, respektive FLACS. Dále jsme zkoumali, zda byla po obou chirurgických přístupech indukována apoptóza v jednovrstevném epitelu pod předním pouzdrem.

2. Materiály a metody

Experimentální studie byla schválena etickou komisí pro lidský výzkum Univerzity v Modeně a Reggio Emilia (Modena, Itálie) a byla provedena v souladu s Helsinskou deklarací na Oftalmologickém institutu Univerzity v Modeně a Reggio Emilia. Do studie byli zařazeni pacienti s kataraktou LOCS III stupně 2 nebo 3 a zrakovou ostrostí do dálky 5/10 nebo horší. Pacienti byli vyloučeni v případě očního traumatu, pseudoexfoliačního syndromu nebo jiných očních komorbidit. Studie byla provedena po písemném souhlasu pacientů, kteří podstoupili buď tradiční manuální extrakci katarakty (B-MICS), nebo femtosekundovou laserem asistovanou operaci katarakty pomocí femtosekundového laseru Ziemer LDV Z8. Všechny chirurgické zákroky prováděl stejný zkušený chirurg (G.M.C.).

2.1. Chirurgické techniky

Důsledná mydriáza byla dosažena instilací 10% fenylefrinu a 1% cyklopentolátu a byla provedena lokoregionální anestezie s peribulbárním blokem (1,5 ml 2% lidokainu a 1,5 ml 0,5% bupivakainu).

2.1.1. Chirurgické techniky

2.1.2. Chirurgické techniky

2.1.3. Chirurgické techniky

2.1.4. Chirurgické techniky

2.1.5. Technika s asistencí FSL

Přiložili jsme opatrně jednorázový sací kroužek k oku, centrovaný nad limbus. Sací kroužek byl naplněn vyváženým solným roztokem (BSS), aby se vytvořilo tekuté rozhraní, a mobilní rameno laserového systému bylo zakotveno nad rohovkovým apexem. Oční struktury byly zobrazeny pomocí integrovaného systému optické koherentní tomografie (OCT) a parametry ošetření byly určeny na míru pomocí průvodce nastavením laserové platformy. Nastavení energie a frekvence laserových pulzů bylo 900 mW, 1 MHz pro kapsulotomii; 950-1000 mW, 2 MHz pro fakofragmentaci; 1200-1300 mW, 2 MHz pro rohovkové řezy. Laserové ošetření začalo fragmentací čočky osmidílným koláčovým řezem, po kterém následovala přední kapsulotomie o průměru 5,2 mm. Nakonec laser provedl dvě rohovkové mikroincize o průměru 1,4 mm na 10. a 2. hodině. Na závěr byl z povrchu oka odstraněn sací kroužek, aby bylo možné pokračovat ve fako zákroku. Chirurg zkontroloval průchodnost CCI pomocí hladké špachtle, nejprve s kolmým sklonem k sklonu limbu a poté jemnými pohyby podél řezu, aby se zcela otevřel ze strany na stranu. Přední komora byla naplněna očním viskoelastickým prostředkem (OVD), aby bylo možné pokračovat v odstraňování předního pouzdra, přičemž bylo třeba dávat pozor na případné tkáňové kapsulární můstky, aby nedošlo k fugě pouzdra.

Hydrodisekce a hydrodelinace byly provedeny pomocí kanyly 26 gauge s injekcí BSS pod okraj předního pouzdra, přičemž bylo třeba dávat pozor na pohyby vzduchových bublin, aby nedošlo k zadnímu kapsulárnímu bloku a ruptuře. Bimanuální fakoemulzifikační technika byla použita k aspiraci jádra pomocí 20-gauge 30stupňové úhlové sondy bez rukávů a 19-gauge irigačního chopperu (Oertli-Instruments AG). Nakonec byla provedena bimanuální irigace/aspirace zbytkové kůry pomocí dvou sond 21-gauge s oválným průřezem (irigační násadec 21-gauge hladký, aspirační násadec 21-gauge drsný, Bausch & Lomb) s následným leštěním zadní kapsuly. Všechny nitrooční čočky byly umístěny do kapsulárního vaku bez komplikací. Odstranění předního pouzdra čočky po manuální přední kapsulorexi nebo přední kapsulotomii s asistencí FSL je znázorněno na obrázku 1.

(a)
(a)
(b)
(b)

. (a)
(a)(b)
(b)

Obrázek 1
Odstranění předního pouzdra čočky u B-.MICS a operační techniky FLACS. (a) Manuální přední kapsulorexe pomocí mikroforcepsů; (b) vzhled čočky po FLACS a odstranění přední kapsulotomie pomocí mikroforcepsů.

2.1.2. Přední kapsulorexe čočky. Standardní technika

Chirurg provedl dva 1,4 mm biplanární trapézové řezy na 10., resp. 2. hodině pomocí předkalibrovaného nože a manuální 5 mm kontinuální zakřivené kapsulorexe (mCCC). Hydrodisekce byla provedena kanylou o průměru 26 a fakoemulzifikace sondou bez rukávů o průměru 20 a úhlu 30 stupňů a irigačním chopperem (Bragamele 19). Fakofraktury bylo dosaženo technikou stop-and-chop. Irigace/aspirace byla provedena dvěma sondami 21-gauge s oválným průřezem (irigační násadec 21-gauge hladký Stellaris, aspirační násadec 21-gauge hrubý, Bausch & Lomb). Při obou technikách byla IOL implantována bez rozšíření hlavního řezu; řezy byly hydroštukovány. BunnyLens AF IOL (Hanita Lenses, Izrael) byly implantovány přes 1,4 mm mikroincizi technikou asistované rány prostřednictvím injektoru ViscoJect™ BIO 1.5. Na konci operace byla OVD odstraněna a incize byly z bezpečnostních důvodů hydratovány.

Pooperační terapie spočívala v aplikaci tobramycinu a dexametazonu v očních kapkách čtyřikrát denně po dobu 15 dnů, následně byly aplikovány flurbiprofenové oční kapky třikrát denně po dobu dalších 15 dnů.

2.2. Hodnocení morfologie: Analýzy pomocí fázového kontrastu, histologické analýzy a skenovací elektronové mikroskopie

Vzorky předního pouzdra čočky získané buď pomocí FSL, nebo standardní technikou byly po chirurgické extrakci okamžitě promyty fyziologickým roztokem fosfátového pufru (PBS). Za účelem vyhodnocení morfologie a okrajů pouzder získaných po obou technikách operace katarakty byly vzorky zpracovány pro analýzu fázovým kontrastem, histologickou analýzu a analýzu skenovací elektronovou mikroskopií. Část vzorků byla fixována 4% paraformaldehydem (PFA) v PBS po dobu 20 minut při pokojové teplotě. Poté byly vzorky třikrát promyty PBS a pozorovány pomocí inverzního mikroskopu Nikon Eclipse TE2000-U. Reprezentativní snímky fázového kontrastu byly pořízeny pomocí CCD kamery Hamamatsu ORCA 285. Poté byly vzorky zpracovány pro histologickou analýzu, a to dehydratací stupňovaným ethanolem, vyčištěním a vložením do parafínu. Pro každý vzorek byly vyříznuty pět μm silné sériové řezy a bylo provedeno rutinní barvení hematoxylinem/eozinem (H&E) za účelem analýzy morfologických detailů a měření tloušťky předních pouzder.

Další část odebraných vzorků byla ihned po chirurgickém zákroku promyta 0,1 M pH 7,4 Sorensonovým fosfátovým pufrem (PB) a fixována 1% glutaraldehydem v 0,1 M pH 7,4 PB. Po třech promytích v PB byly vzorky předního pouzdra čočky dehydratovány odstupňovaným ethanolem, dokud nebylo provedeno pozorování SEM. Snímky SEM byly pořízeny pomocí rastrovacího elektronového mikroskopu (SEM) Nova NanoSEM 450 (FEI).

Hlavním cílem těchto analýz bylo vyhodnocení vrstvy epiteliálních buněk, přítomnosti třásní na okrajích pouzdra a drsnosti/hladkosti okrajů.

2.3. Snímky SEM byly pořízeny pomocí rastrovacího elektronového mikroskopu Nova NanoSEM 450 (FEI). Hodnocení apoptózy v LEC

Pro vyhodnocení, zda došlo k apoptóze v epiteliálních buňkách čočky přiléhajících k přednímu pouzdru čočky po chirurgickém přístupu B-MICS a po uvolnění energie pulzu femtosekundovým laserem, byly vzorky zpracovány pro konfokální imunofluorescenční analýzu, jak bylo popsáno dříve . Kapsle fixované 4% roztokem byly promyty PBS a nasyceny PBS obsahujícím 3% bovinní sérový albumin (BSA) po dobu 30 minut při pokojové teplotě. Poté byly vzorky inkubovány s králičí primární protilátkou proti odštěpené kaspáze 3 (Cell Signaling) zředěnou 1 : 50 v PBS obsahujícím 3 % BSA po dobu 1 hodiny při pokojové teplotě. Po promytí v PBS obsahujícím 3 % BSA byly vzorky inkubovány s kozí protilátkou proti králíkovi Alexa546 (Life Technologies), zředěnou 1 : 200 v PBS obsahujícím 3 % BSA. Vzorky byly následně promyty PBS, obarveny 1 mg/ml 4′,6-diamidino-2-fenylindolu (DAPI) v PBS po dobu 1 minuty a poté upevněny pomocí média proti vyblednutí. Fluorescenční vzorky byly pozorovány konfokálním laserovým skenovacím mikroskopem Nikon A1. Konfokální sériové řezy byly zpracovány pomocí softwaru ImageJ pro získání trojrozměrných projekcí a vykreslení obrazu bylo provedeno pomocí softwaru Adobe Photoshop .

2.4. Statistická analýza

Data byla vyhodnocena pomocí statistického softwaru (GraphPad Prism Software verze 7 Inc., San Diego, CA, USA). Rozdíly mezi oběma experimentálními skupinami byly analyzovány pomocí Studentova -testu. Údaje byly vyjádřeny jako průměr ± SD. Každé experimentální hodnocení bylo provedeno ve třech opakováních. V každém případě byla signifikance stanovena na .

3. Výsledky

3.1. Klinická pozorování

U skupiny 1 (FLACS) bylo do studie zařazeno 30 očí (15 pravých a 15 levých očí) 30 pacientů (10 mužů a 20 žen); průměrný věk byl 74,07 ± 8,48 let. Ve skupině 2 (B-MICS) bylo do studie zařazeno 30 očí (13 pravých očí a 17 levých očí) 30 pacientů (8 mužů a 22 žen); průměrný věk byl 75,72 ± 9,16 let. Do všech očí byla implantována IOL BunnyLens AF. Všechny IOL byly implantovány do vaku.

Celková doba operace byla ve skupině 1 17,89 ± 3,80 minuty, zatímco ve skupině 2 to bylo 12,63 ± 2,10 minuty, přičemž rozdíl se ukázal jako statisticky významný (). Ve skupině 1 nebyla pozorována žádná neúplná kapsulotomie ani kapsulární knoflíky; navíc v obou skupinách nebyla zaznamenána žádná intraoperační závažná komplikace ani žádná pooperační komplikace.

Tři měsíce po operaci bylo ve skupině 1 pozorováno průměrné zlepšení BCVA o 0,460 ± 0,249 LogMar ( oproti výchozím hodnotám). Podobně ve skupině 2 bylo ve stejné době hodnocení pozorováno průměrné zlepšení BCVA o 0,417 ± 0,150 LogMar ( oproti výchozím hodnotám). Mezi oběma skupinami nebyly pozorovány žádné statisticky významné rozdíly ve zlepšení zrakové ostrosti.

Co se týče astigmatismu a pachymetrie rohovky, nezjistili jsme žádný statisticky významný rozdíl mezi výchozími a pooperačními hodnotami pomocí Studentova testu ani v rámci jednotlivých skupin, ani mezi oběma skupinami ().

Nakonec, pokud jde o počet endoteliálních buněk (ECC), ve skupině 1 jsme při tříměsíčním sledování zjistili průměrný úbytek endoteliálních buněk 162,27 ± 225,11 buněk/mm2 a 322,52 ± 339,93 buněk/mm2 po operaci ve skupině 2, což je snížení, které bylo statisticky významné buď v rámci každé skupiny, nebo mezi oběma skupinami (). Morfologická analýza: Analýzy fázového kontrastu, histologické analýzy a analýzy skenovací elektronovou mikroskopií

Snímky fázového kontrastu ukázaly epiteliální buňky s dobře zachovanými jádry a cytoplazmou, kromě toho odhalily neporušené buněčné hranice na většině povrchu epitelu, s výjimkou těsnější blízkosti okrajů kapsuly, kde byly epiteliální buňky odděleny od bazální membrány (obrázek 2(a)). Okraje kapsulí se jevily jako pravidelné a hladké, jak je uvedeno na obrázku 2(a). Pokud jde o vzhled kapsuly u skupiny FLACS, epitelové buňky byly většinou přirostlé k bazální membráně, zatímco okraje vykazovaly méně pravidelný, pilovitý vzorek (obrázek 2b). Histologická analýza potvrdila, že některé vzorky ze skupiny B-MICS vykazovaly částečné odloučení epiteliální vrstvy od bazální membrány, zatímco většina kapsulí ze skupiny FLACS vykazovala souvislé přilnutí epiteliálních buněk a bazální membrány (obrázek 3). Měření tloušťky kapsul mezi oběma experimentálními skupinami navíc odhalilo rozdíl, i když bez statistické významnosti. Zejména vzorky získané technikou FLACS vykazovaly větší tloušťku ve srovnání s kapslemi získanými technikou B-MICS (údaje nejsou uvedeny).

(a)
(a)
(b)
(b)

. (a)
(a)(b)
(b)

Obrázek 2
Histomorfologické hodnocení předních pouzder čočky. Snímky s fázovým kontrastem zobrazující okraje a epiteliální vrstvu předních pouzder čočky získané technikou B-MICS (a) a femtosekundovým laserem asistovanou operací katarakty (b). Sloupec: 100 μm.

Obrázek 3
Histologická analýza předních čočkových pouzder. Příčné řezy vzorků byly obarveny hematoxylinem a eozinem. Na pravé straně snímky s větším zvětšením ukazují detaily epitelové vrstvy u vzorků získaných technikou B-MICS a FLACS. Sloupec: 10 μm.

Nakonec analýza SEM, jak je uvedeno na obrázku 4, odhalila s větším rozlišením, jak rovnoměrné je přilnutí epiteliálních buněk k bazální membráně, a především výskyt kapsulárních okrajů. Zejména u skupiny B-MICS měly okraje kapsuly pravidelný, hladký a průsvitný lem (obrázek 4 a)). V opačném případě okraje kapsulí získané pomocí FLACS jasně vykazovaly nepravidelný a třásnitý vzhled (obrázek 4(b)).

(a)
(a)
(b)
(b)

. (a)
(a)(b)
(b)

Obrázek 4
Analýza skenovací elektronovou mikroskopií. Reprezentativní snímky vzorků získané technikou B-MICS (a) a (b) FLACS, zobrazující vzhled epitelové vrstvy (vlevo) a okrajů (vpravo) při různých zvětšeních.

3.3. Vzorky získané technikou B-MICS. Hodnocení apoptózy v LEC

Konfokální imunofluorescenční analýza odhalila, že v epiteliálních buňkách čočky vzorků získaných buď ze skupiny B-MICS, nebo ze skupiny FLACS došlo k apoptóze, jak ukazuje obrázek 5(a). Zatímco u tobolek získaných manuální chirurgickou technikou byla přítomnost štěpené kaspázy 3 pozorována především v epiteliálních buňkách blíže k okrajům tobolky, vzorky odebrané technikou FLACS vykazovaly více rozprostřené barvení proti štěpené kaspáze 3, od okraje až po jádro epiteliální vrstvy. Pseudobarevné obrazy štěpené kaspázy 3 byly získány podle předchozího popisu a uvedeny na obrázku 5b). Denzitometrická analýza provedená na imunofluorescenčních signálech poskytla semikvantitativní údaje o expresi apoptotického efektoru štěpené kaspázy 3, která byla statisticky významně vyšší ve skupině FLACS vzhledem ke skupině B-MICS (obrázek 5b); ).

(a)
(a)
(b)
(b)

(a)
(a)(b)
(b)

Obrázek 5
Hodnocení buněčné apoptózy u epiteliálních buněk adherujících k přednímu pouzdru čočky. (a) Imunofluorescenční analýza byla provedena proti štěpené kaspáze 3 (červená) a jádra byla kontrastně zbarvena DAPI (modrá). (b) Pseudobarevné snímky (nahoře) a denzitometrická analýza (dole) štěpené kaspázy 3 v epiteliálních buňkách. Bar: 20 μm.

4. Diskuse

Použití femtosekundových laserů představuje nejnovější úspěch v chirurgii katarakty, počínaje jejich prvním klinickým použitím v roce 2008. Vzhledem k rostoucí nutnosti řešit očekávání optimálního refrakčního výsledku bylo naplněno mnoho nových vývojových trendů.

Použití femtosekundového laseru při operaci katarakty umožnilo zlepšit bezpečnost a účinnost zákroku, jak je dobře zdokumentováno v literatuře . Předchozí zprávy totiž prokázaly vysokou opakovatelnost a přesnost při provádění nejobtížnějších fází operace katarakty, včetně optimalizované přední kapsulotomie, při níž vznikl souvislý řez s ostrými hranami a dobrou pevností v tahu .

Naše studie hodnotila morfologické vlastnosti lidských předních kapsul získaných standardní fakoemulzifikační technikou, resp. technikou FLACS. Posledně jmenované byly získány po použití Ziemer LDV Z8, femtosekundového laseru, který využívá výhod nízkoenergetického vysokofrekvenčního systému (vysoká opakovací frekvence pulzů – až 10 MHz – v kombinaci s velmi nízkým rozsahem energie 100-150 nJ) a využívá rozhraní s tekutou optikou k usnadnění fáze kapsulotomie a fragmentace čočky. Tyto vlastnosti umožnily získat vzorky předního pouzdra s dobře zachovanou histomorfologií, s rovnoměrně přiléhajícími epiteliálními buňkami, ve srovnání se vzorky získanými manuální technikou, jak prokázaly analýzy fázového kontrastu a SEM. V souladu s existující literaturou byly okraje předních kapslí získaných pomocí FLACS méně pravidelné a vyznačovaly se pilovitým vzorem ve srovnání s hladkým okrajem získaným manuální technikou. Vzor pozorovaný u skupiny FLACS lze s největší pravděpodobností přičíst vysoké hustotě pulzního rastru a vysoce přesné optice laseru Femto LDV Z8, které mají za následek více překrývajících se bodů, jež vytvářejí souvislý čistý řez, podobný tomu, který byl získán technikou B-MICS .

Vzorky předního pouzdra získané technikou FLACS také vykazovaly větší tloušťku ve srovnání s pouzdry získanými technikou B-MICS, pravděpodobně v důsledku přítomnosti kůry přiléhající k přednímu pouzdru.

Kromě histomorfologických charakteristik naše údaje ukázaly, že v epiteliálních buňkách předních pouzder získaných oběma chirurgickými technikami došlo k apoptóze. Zejména exprese štěpené kaspázy 3 byla významně vyšší ve vzorcích odebraných po FLACS, přičemž pozitivní barvení nebylo omezeno na buňky podél řezné hrany, ale šířilo se i do vnitřního jádra pouzdra, což naznačuje širší indukci buněčné smrti. Naopak v epiteliální vrstvě přiléhající k vzorkům kapsuly získaným postupem B-MICS byla zjištěna apoptóza pouze podél řezného okraje, což je důsledek mechanického poškození vyvolaného kleštěmi zprostředkovanou extrakcí přední kapsuly. Tato větší apoptóza postihující jednovrstevný epitel pod předním pouzdrem po FLACS je pravděpodobně způsobena energií laserového pulzu, tvorbou plazmy závislou na fotodisrupci a následným vznikem kavitačních bublin . Naše údaje jsou v souladu s předchozími zjištěními Mayera et al. a zejména rozšířená exprese apoptotického efektoru štěpené kaspázy 3 může představovat pozitivní prediktivní faktor, který umožňuje zabránit opacifikaci kapsulárního vaku tím, že silně inhibuje proliferaci reziduálních epiteliálních buněk, která obecně koreluje s pooperační zánětlivou reakcí . Z klinického hlediska naše studie zdůraznila, že 3 měsíce po operaci vykazovali pacienti ze skupiny FLACS nebo B-MICS statisticky významné zlepšení hodnot nejlépe korigované zrakové ostrosti (BCVA) vzhledem k výchozím měřením. Za zmínku stojí, že pokud jde o počet endoteliálních buněk, byl ve skupině FLACS pozorován statisticky významný pokles úbytku rohovkových endoteliálních buněk, což je událost, kterou lze přičíst kratší době fakoemulzifikace. Tyto údaje jsou v souladu s předchozími zjištěními, která prokazují, že laserová operace katarakty je méně traumatizující pro rohovkový endotel, kromě toho, že nabízí chirurgům nástroj ke standardizaci kritických fází operace katarakty prostřednictvím počáteční křivky učení .

5. Závěry

Použití femtosekundového laseru při operaci katarakty umožňuje optimalizovat některé z nejobtížnějších kroků zákroku, včetně kapsulotomie, nukleární fragmentace a rohovkových řezů, a kromě toho poskytuje přesnější a opakovatelné výsledky. Naše zjištění jsou v souladu s existující literaturou, nicméně bude zapotřebí dalších studií, které by srovnaly světlé stránky manuální techniky a femtosekundového laseru, a to definováním optimální kombinace energie laseru, opakovací frekvence a velikosti skvrny, aby bylo možné získat kvalitnější kapsulotomie s pravidelnými řeznými hranami srovnatelnými s těmi, které se provádějí při manuální kapsulorexi, a aby se snížila zánětlivá reakce v oku, a tím se zabránilo proliferaci epiteliálních buněk čočky a opacifikaci kapsulárního vaku.

Zkratky

FLACS: Femtosekundová laserem asistovaná operace katarakty
B-MICS: Bimanuální mikroincizní operace katarakty
mCCC: Manuální kontinuální zakřivená kapsulorexe
IOL: Intraokulární čočka
PCO: Zakalení zadní kapsuly
BSS: Vyvážený solný roztok
OCT: Optická koherenční tomografie
OVD: Oční viskoelastický přístroj
PBS: Fosfátový pufr
PFA: Paraformaldehyd
H&E: Haematoxylin/eosin
SEM: Scanning electron microscope
BSA: Bovinní sérový albumin
DAPI: 4′,6-Diamidino-2-fenylindol.

Zveřejnění

Tato práce byla částečně prezentována na 20. zasedání AICCER 2017 (Associazione Italiana di Chirurgia della Cataratta e Refrattiva), 9.-11. března, Rimini (Itálie), 2017.

Konflikty zájmů

Autoři prohlašují, že nedošlo k žádnému finančnímu konfliktu zájmů.

Articles

Napsat komentář

Vaše e-mailová adresa nebude zveřejněna.