Abstract
5-5′‘-Dithio-bis(2-nitrobenzoová kyselina) (DTNB nebo Ellmanovo činidlo; ref. 1) reaguje s volným sulfhydrylovým postranním řetězcem cysteinu za vzniku vazby S-S mezi proteinem a zbytkem kyseliny thionitrobenzoové (TNB). Modifikace je obecně rychlá a selektivní. Hlavní výhoda DTNB oproti alternativním činidlům (např. N-ethylmaleimidu nebo jodoacetamidu) spočívá v selektivitě tohoto činidla a v možnosti sledovat průběh reakce spektrofotometricky. Reakce obvykle probíhá při pH 7,0-8,0 a modifikace je stabilní za oxidačních podmínek. Skupinu TNB lze z modifikovaného proteinu uvolnit působením činidel, která se běžně používají k redukci vazeb S-S, např. merkaptoethanolu, nebo kyanidu draselného (2) (viz poznámka 1). Kromě toho lze využít často velmi výrazných rozdílů v reaktivitě různých postranních řetězců cysteinu ve stejném proteinu nebo dokonce aktivním místě a dostupnosti různých thiol-modifikujících činidel k selektivní modifikaci postranních řetězců cysteinu v proteinech v přítomnosti jiných, reaktivnějších zbytků cysteinu (3).
.