DESIGN A METODY VÝZKUMU
Do této studie bylo zařazeno celkem 55 pacientů s diabetem 2. typu léčených pouze dietou a sulfonylureou (tabulka 1). BMI bylodhadnut vydělením tělesné hmotnosti (v kilogramech) druhou mocninou výšky (v metrech).
- Zobrazit inline
- Zobrazit popup
- Stáhnout powerpoint
Diabetes byl diagnostikován podle kritérií Americké diabetologické asociace (14). U subjektů s hladinou plazmatické glukózy nalačno ≥ 7,0 mmol/l byl předběžně diagnostikován diabetes. Poté subjekty podstoupily 75g orální glukosetoleranční test (OGTT) (Trelan G 75; Shimizu, Shizuoka, Japonsko) a u subjektů s hladinou glukózy v plazmě po snídani ≥ 7,0 mmol/l nebo s dvouhodinovou hladinou glukózy v plazmě ≥ 11,1 mmol/l byl diagnostikován diabetes. Diabetes 2. typu byl definovánpodle stupně sekrece inzulínu, věku, způsobu vzniku a existence rodinné anamnézy diabetu.
Při přijetí bylo 50 pacientů léčeno pouze dietou a 5 sulfonylureou (glibenklamid 2,5-5,0 mg/den). Žádný z pacientů nebyl léčen inzulinem nebo inzulin-senzibilizujícími látkami. Patnáct pacientů mělo periferní neuropatii a prostou diabetickou retinopatii a 10 mělo mikroalbuminurii. Makrovaskulární komplikace nebyly zjištěny.
Před zahájením studie byl od všech subjektů získán informovaný souhlas.
Plán studie
Po přijetí byli pacienti podrobeni dietě a cvičení po dobu 6 týdnů. Dietní léčba byla následující: 1 440-1 720 kcal/den s dietou sestávající z 20 % (energetických) bílkovin, 25 % tuků a 55 % sacharidů. Dodržování dietní léčby kontroloval dietolog dvakrát týdně. Během pohybové terapie pacienti denně ušli přibližně 10 000 kroků; počet kroků za den byl počítán pomocí krokoměru a každý den byl počet kontrolován zdravotní sestrou. Dieta a pohybová terapie nebyly v průběhu léčby měněny.
Hladiny glukózy, HbAlc a inzulínu v krvi; hodnotyclamp-IR, HOMA-IR a jednoduchých indexů citlivosti na inzulín (30min a 2h glykemie, 30min a 2h inzulín a 30min a 2h index citlivosti na inzulín získané během 75g OGTT)(9,10); a plocha tělesného tuku a krevní tlak byly měřeny u všech subjektů během 1 týdne po přijetí a 1 týden před propuštěním. Sulfonylureové přípravky byly vysazeny1 den před klešťovou studií; žádný z pacientů nedostával poprvní klešťové studii během léčby žádný lék.
Hladina glukózy v plazmě byla měřena automatickou enzymatickou metodou. HbAlc (normální hodnota 4,3-5,8 %) byl měřen vysokoúčinnou kapalinovou chromatografií. Inzulín v séru byl měřen pomocí imunoradiometrické testovací soupravy (souprava Insulin Riabead II; Dainabot, Tokio). Tato souprava obsahovala mousemonoklonální protilátky proti lidskému inzulínu značené125I a neznačené. Intra- a inter-assay variační koeficienty testu byly 1,9, resp. 2,0 %.
Clampová IR byla hodnocena technikou hyperinzulinemicko-euglykemického clampu za použití umělého pankreatu (STG-22; Nikkiso, Tokio)(1,7,15,16,17,18).stručně řečeno, v 8:00 ráno, byly zavedeny dvě kanyly potažené teflonem; jedna byla zavedena do levé antecubitální žíly pro infuzi inzulínu (Humulin R; Eli Lilly, Indianapolis, IN) a 10% glukózy a druhá byla zavedena do pravé kontralaterální vyhřívané žíly ruky pro odběr arteriální krve.Po základním odběru krve pro stanovení glukózy a inzulínu byla během úvodních 10 minut podána základní dávka inzulínu, a to logaritmicky klesajícím způsobem, aby se sérový inzulín rychle zvýšil na požadovanou hladinu (1 200 pmol/l); tato hladina inzulínu byla poté udržována kontinuální infuzí inzulínu rychlostí 13,44 pmol – kg-1- min-1 po dobu 120 minut. Průměrná hladina inzulinu dosáhla stabilní úrovně mezi 90 a 120 min po zahájení clampové studie (před léčbou 1 224,0 ± 208,8 pmol/l; po léčbě 1 177,2 ± 232,8 pmol/l).Glukóza v krvi byla kontinuálně monitorována a udržována na požadované úrovni (5,24 mmol/l) infuzí 10% glukózy. Průměrné množství glukózy podané během posledních 30 min bylo považováno za rychlost infuze glukózy, která byla brána jako hodnota clampové IR.
HOMA byla použita k hodnocení inzulinové rezistence před léčbou a po ní(2). Za předpokladu, že normálnísubjekty ve věku <35 let s normální hmotností mají IR 1, lze hodnoty propacienta vypočítat z koncentrací inzulínu aglukózy nalačno podle následujícího vzorce: inzulín v séru nalačno (μU/ml) × glukóza v plazmě nalačno (mmol/l)/22,5 . Vzorky krve pro měření HOMA-IRbyly odebrány každému subjektu od 8:00 ráno po nočním odpočinku na lůžku. Vyšetřili jsme tři samostatné vzorky inzulínu odebrané s odstupem 15 minut a pro výpočet HOMA-IR jsme použili průměrnou hladinu inzulínu. Abychom odhadli reprodukovatelnost HOMA-IR, analyzovali jsme u všech pacientů druhý HOMA-IR při další příležitosti během 5 dnů od prvního HOMA-IR před léčbou a po ní. Koeficient variability pro HOMA-IR před léčbou byl 10,2 %a po léčbě 9,8 %.
OgTT 75 g byl zahájen od 8:00 hodin ráno po nočním klidu na lůžku(hladovění po dobu 11:00 hodin). Krev byla odebrána v 0., 30. a 120. min a byly hodnoceny hladiny plazmaglukózy a inzulínu v séru.
Plocha tělesného tuku byla hodnocena podle dřívějšího popisu(19). Celková plocha průřezu, plocha intraabdominálního viscerálního tuku a plocha podkožního tuku byly měřeny pomocí břišní počítačové tomografie pořízené v úrovni pupku. Jakákoli intraperitoneální oblast, která měla stejnou hustotu jako podkožní tuková vrstva, byla definována jako oblast viscerálního tuku.
Tlak krve byl stanoven třikrát v poloze na zádech po pětiminutovém odpočinku.
Statistické analýzy
Údaje jsou vyjádřeny jako průměr ± SD. Pro porovnání průměrů proměnných měřených před léčbou a po ní byl proveden Studentův t-test. Vztah clamp IR s několika klinickými ukazateli citlivosti na inzulín byl hodnocen pomocí jednorozměrné regresní analýzy. porovnání regresních přímek, s ohledem na sklony a intercepty,mezi HOMA-IR a clamp IR před a po léčbě bylo provedeno pomocí analýzy kovariance; v této analýze byl použit F test k vyhodnocení rozdílu mezi dvěma regresními koeficienty. Aby se hodnoty HOMA-IR a clamp IR přiblížily normálnímu rozdělení, byly všechny před regresní a kovarianční analýzou logaritmicky transformovány. Studentův test a korelace byly provedeny pomocí softwarového programu StatView 4.0 (Abacus Concepts, Berkeley, CA) pro Macintosh. Analýza kovariance a regresní analýza byly provedeny pomocí softwarového programu PRISM 2.0 (Graph-Pad software, San Diego, CA) pro Macintosh. Hodnota pravděpodobnosti P < 0,05 při oboustranných testech byla považována za statisticky významnou.